بررسی پایداری حرارتی آنزیم پراکسیداز گیاه لیپیدیوم درابا در دماهای مختلف

پراکسیدازها آنزیم هایی هستند که در موجودات مختلف از قبیل جانوران، گیاهان و میکروارگانیسم ها یافت می شوند. این آنزیم ها، اکسیدوردوکتازهایی هستند که می توانند در حضور پراکسید هیدروژن از ترکیبات مختلف به عنوان اهدا کننده هیدروژن استفاده کنند و در تجزیه آلاینده ها، صنایع غذایی و نساجی، تصفیه فا ضلاب ها و در بیوسنسورها کاربرد فراوان دارند. هدف ا صلی این پژوهش، بررسی پایداری حرارتی آنزیم پراکسیداز گیاهی لیپیدیوم درابا (LDP) (EC ۱.۱۱.۱.۷)در دماهای مختلف می با شد. در این مطالعه، پس از بیان آنزیم نوترکیب در محیط LB مایع در حضورIPTG ، تخلیص آن با استفاده از ستون کروماتوگرافی میل ترکیبی نیکل سفارز و بافر جداکننده حاوی ایمیدازول انجام شد. میزان خلوص پروتئین با استفاده از SDS-PAGE و غلظت ان با استفاده از روش برادفورد اندازه گیری شد. به منظور بررسی پایداری حرارتی، آنزیم با غلظت ۰/۵میلی گرم بر میلی لیتر در محدوده دمایی ۳۰ تا ۸۰ درجه سانتی گراد به مدت ۱۰ دقیقه انکوبه گردید. و به مدت ۵ دقیقه در دمای اتاق نگهداری شد. سپس فعالیت آنزیم بوسیله پراکسید هیدروژن و TMBبعنوان سوبسترا های آنزیم در بافر فسفات پتاسیم (pH=۷) در طول موج ۶۵۳ نانومتر با استفاده از دستگاه اسپکتروفتومتر مدل carry ۶۰ سنجیده شد. نتایج بد ست امده از این تحقیق ن شان داد که فعالیت آنزیم در محدوده دمایی ۳۰ تا ۴۰ درجه سانتی گراد بی شتر بوده و با افزایش دما فعالیت آن کاهش می یابد. بطوریکه، در بالاترین دما ۸۰) درجه سانتی گراد) حدود۵۳ در صد فعالیت اولیه آنزیم حفظ شده ا ست. پیشنهاد می شود از روش های جهش زایی برای افزایش پایداری دمایی برای استفاده از این آنزیم مزوفیل در دماهای بالاتر استفاده شود.

کلیدواژه ها:

تخلیص ، پراکسید هیدروژن ، فعالیت