جداسازی و شناسایی تیپ های مختلف کلستریدیوم پرفرنجنس از موارد مشکوک به آنتروتوکسمی در استان خراسان رضوی

آنتروتوکسمی یکی از بیماریهای شایع و کشنده در گوسفند، گاو ، شترمرغ و برخی حیوانات اهلی می باشد . عامل بیماری باکتری کلستریدیوم پرفرنجنس است که بر اساس تولید 4 نوع توکسین اصلی به نام های الفا ، بتا، اپسیلون و یوتا به پنج تیپ توکسیژنیک ‭(A‬،B،C،D،‭E) ‬تقسیم بندی می شود. با شناسایی نوع توکسین می توان تیپ باکتری را تعیین نمود. وجود مقادیر بالایی از این توکسینها به همراه باکتری در محتویات روده حیوانات نشانگر وجود بیماری است. هدف از این تحقیق جداسازی و شناسایی تیپهای مختلف کلستریدیوم پرفرنجنس از موارد مشکوک به انتروتوکسمی در استان خراسان رضوی به روش کشت و ‭ELISA ‬بود. بدین منظور تعداد ‮‭16‬ مورد از لاشه های مشکوک به آنتروتوکسمی (ارسال شده از کلینیک های دامپزشکی) و همچنین تعداد ‮‭50‬ نمونه از هر یک از نمونه های خاک مرتع، مدفوع گوسفند ،گاو ، شتر و شترمرغ جمع آوری و روی محیط اختصاصی کشت کلستریدیوم پرفرنجنس‭(perfringrns Selective Agar) ‬و محیط آگار خوندار واجد آنتی بیوتیک های پلی میکسین و نیومایسین در شرایط بیهوازی کشت داده شدند. کلنی های جدا شده پس از خالص سازی از نظر پذیرش رنگ گرم ، توانایی رشد در شرایط هوازی ، توان حرکت، توانایی تخمیر گلوکز ، سوکروز، لاکتوز، اسکولین و توان تولید آنزیم های نیترات ردوکتاز، آمیلاز، لسیتیناز، لیپاز، ژلاتیناز، کاتالاز، و تریپتوفاناز مورد آزمون قرار گرفتند. تایید تشخیص آزمون های بیوشیمیایی و توکسینوتایپینگ با تعیین وجود پروتیین های ساختمانی و یا توان تولید توکسینهای ماژور آلفا، بتا و اپسیلون توسط باکتری با استفاده از کیت های الایزای شرکت ‭BioX ‬با حساسیت و ویژگی بیش از ‮‭99‬ درصد انجام گرفت. روش کشت و آزمون های بیوشیمیایی تعداد 3 مورد از نمونه های آنتروتوکسمی، ‮‭13‬ مورد مدفوع شترمرغ، 8 مورد شتر ، 4 مورد گاو ، 9 مورد گوسفند و 3 مورد از نمونه های خاک مرتع را از نظر وجود باکتری کلستریدیوم پرفرنجنس مثبت و یا مشکوک تلقی نمود. آزمون الیزا تمامی نمونه ها را تایید و به ترتیب نمونه ها از تیپ ‭A ‬تعداد 1 ، ،2 ،6 ،‮‭4 1‬ و2 مورد و در نمونه های آنتروتوکسمی ، شتر و گوسفند تعداد ،‮‭1 2‬ و3 مورد از تیپ ‭D ‬را تشخیص داد. مابقی نمونه ها غیر توکسین زا تشخیص داده شدند. از تیپ های ‭C ‬، ‭B ‬هیچ موردی مشاهده نگردید. در بسیاری از تحقیقات مشابه شیوع تیپ ‭A ‬در مدفوع حیوانات و طبیعت و نیز وجود آنتروتوکسمی های ناشی از تیپ ‭D ‬در منطقه تایید شده است. کلمات کلیدی: کلستریدیوم پرفرنجنس ، توکسین ، ‭ELISA