کلونینگ ژن فلاژلین سالمونلا انتریتیدیس

سالمونلا انتریتیدیس عاملی عمده در ایجاد سالمونلوز منتقله از غذا در انسان میباشد. طیور از جمله مهمترین منابع این میکروب میباشند و واکسیناسیون طیور بر ضد سالمونلا انتریتیدیس منجر به کاهش ریسک ابتلا به سالمونلوز در انسان میشود. واکسنهای موجود برای این منظور شامل سلولهای کشته و یا ضعیف شده سالمونلا انتریتیدیس هستند که در آنها ریسک بازگشت به پاتوژنی وجود دارد. بکارگیری میکروارگانیزمهای غیر پاتوژن در ایجاد واکسنها بدلیل ایمنی بالاتر در این سیستمها بسیار مورد توجه است. فلاژلین واحد ساختاری تشکیل دهنده فیلامنت فلاژل سالمونلاست که قادربه ایجاد ایمنی بر ضد سالمونلا است. تولید فلاژلین در میکروارگانیزمهای غیر پاتوژن میتواند منجربه ایجاد سیستمهای ایمن تر برای مقابله با سالمونلوزگردد. برای این منظور در این پروژه ژن فلاژلین ‭Salmonella Enteritidis SGSC‬‮‭2475‬ و دو ایزوله ایرانی سالمونلا انتریتیدیس با استفاده از وکتور ‭ pet‬‮‭28‬‭a ‬در باکتری ‭E. coli BL‬‮‭21‬‭(DE‬3) کلون شد. نتایج تعیین توالی نشان دهنده یکسان بودن توالی ژن فلاژلین در سه سویه مورد آزمایش سالمونلا انتریتیدیس بوده است. انجام ‭ BLAST‬با استفاده از توالی امینواسیدی مرتبط نشان دهنده یکسان بودن این توالی با غالب توالی های آمینو اسیدی گزارش شده برای فلاژلین سالمونلا انتریتیدیس در سایت ‭NCBI ‬بوده است و به این ترتیب فلاژلین با این سکانس غالب بعنوان کاندید واکسن ضد سالمونلوز مطرح است. اما وجود جایگزینی امینو اسیدی در برخی موارد نشان دهنده لزوم توجه به نقش این تغییرات امینواسیدی در تاثیر محافظتی فلاژلین است. القای ابراز ژن فلاژلین سالمونلا انتریتیدیس در ‭E. coli BL‬‮‭21‬‭(DE‬3) با استفاده از ‭IPTG ‬منجر به تولید پروتیین نوترکیب در وزن ملکولی مورد انتظار در حدود ‮‭55‬ ‭kDa ‬شد. آنالیز ‭solubility ‬فلاژلین ابراز شده نشان دهنده تولید این پروتیین در سلول در هر دو فرم ‭soluble ‬و ‭inclusion body ‬است و به این ترتیب امکان خالص سازی فلاژلین تولید شده در فرم ‭native ‬آن از بخش ‭soluble ‬سلول باکتری وجود دارد. واژه های کلیدی: سالمونلا، سالمونلا انتریتیدیس، سالمونلوز، طیور، فلاژلین