راه اندازی روش ‭Multiplex PCR ‬برای شناسایی و افتراق ‭Nosema apis ‬و ‭Nosema ceranae ‬عوامل ایجاد کننده ‭Nosemosis ‬در کلنی های زنبور عسل

نوزموزیس شایعترین بیماری در زنبوران بالغ می باشد و عامل آن یک انگل میکروسپوریدیایی به نام نوزما است. میکروسپوریدیاها انگل های داخل سلولی هستند و بین میزبانها بصورت اسپور منتقل می شوند. دو گونه نوزما آپیس و نوزما سرانه عامل خسارتهای اقتصادی مهمی به زنبورداران در سراسر جهان می باشند، تشخیص و افتراق گونه های نوزما در ریزش ها از اهمیت ویژه ای برخوردار است‭. PCR ‬با استفاده کنترل های مثبت (برای نوزما آپیس ژن مورد نظر سنتز و سپس در پلاسمید کلون شده و به داخل E،‭coli ‬ترانسفرم گردید و پس از استخراج پلاسمید برای کنترل مثبت استفاده شده است) دو سویه نوزما سرانه و نوزما آپیس راه اندازی گردید و سپس نمونه های بیمار با آن روش مورد آزمایش قرار گرفتند. دستگاه گوارش زنبورهای بیمار جدا و با آب مقطر استریل خوب هموژن می شدند. پس از صاف کردن، سانتریفیوژ و سایر مراحل آماده سازی، رسوب برای جداسازی ‭DNA ‬به کار می رفت. سپس ‭PCR ‬با استفاده از هر دو پرایمر نوزما آپیس و نوزما سرانه بطور همزمان انجام می شد (مولتی پلکس) و محصول روی ژل آگارز 2 % الکتروفورز می گردید. از مجموع ‮‭41‬ نمونه مثبت نوزما که در فواصل سال های ‮‭83-92‬ در بخش بیماریهای زنبور عسل، کرم ابریشم و حیات وحش بوسیله میکروسکوپ نوری تایید تشخیص داده شده بود، پس از ‭PCR‬، تمامی موارد نوزما سرانه تشخیص داده شدند (نمونه ها از 5 استان جمع آوری شده بودند). 9 نمونه برای سکانسینگ ارسال شد که نتایج آن، نوزما سرانه بودن نمونه ها را تایید کرد.