تعیین پلی مورفیسم مولکولی بروسلاهای جداشده از ایران با روش ‭Real Time PCR ‬بر پایه ‭SNP‬

بروسلوز بیماری مشترک بین انسان و دام است که از حیوانات آلوده به انسان انتقال مییابد. شش گونه کلاسیک شامل بروسلا آبورتوس، ملیتنسیس، سوییس، کنیس، نیوتومه و اویس وجود دارد. در سالهای اخیر چهار گونه جدید شامل بروسلا ستهایی، ماریس، پنی پدیالیس و اینوپیناتا ،‭B. pinnipediae B. cetaceae‬، ‭B. maris B. inopinat ‬گزارش شده است. روشهای کلاسیک و استاندارد برای تشخیص بیماری بروسلوز شامل جداسازی باکتری بروسلوز از نمونههای کلینیکی همچنین روشهای سرولوژی بر اساس تماس با عامل بیماری و ردیابی آنتیبادیهای تولید شده میباشند. این روشها علاوه بر نیاز به زمان طولانی جهت قرایت نتایج و خطر آلودگی پرسنل آزمایشگاه، دارای حساسیت و اختصاصیت پایین میباشند. در سالهای اخیر روشهای مولکولی زیادی برای تشخیص این باکتری مورد استفاده قرار گرفتهاند. روش ‭Real Time PCR ‬از این نظر که نیازمند صرف زمان کم و دارای حساسیت و اختصاصیت بالایی میباشد، در تشخیص و تایپینگ این بیماری بسیار مفید میباشد. در این مطالعه ابتدا از تعداد 8 جفت پرایمر جهت تمایز گونههای بروسلا طبق گزارش جفری و همکاران در سال ‮‭2008‬ استفاده شد. نتایج نشان داد که این پرایمرها قدرت تفکیک گونههای بروسلا را ندارند. لذا به منظور یافتن جایگاه اختصاصی جهت تمایز گونهها، مقایسه ژنومی صورت گرفت که پس از یافتن نواحی اختصاصی اقدام به طراحی پرایمرهای برای تفکیک بروسلا آبورتوس و بروسلا ملیتنسیس گردید. پرایمر ‭ab‬2 برای جداسازی بروسلا آبورتوس و پرایمر U1 برای جداسازی بروسلا ملیتنسیس در نظر گرفته شد. آزمایشات تعیین اختصاصیت و حساسیت، و همچنین مطالعات بیوانفورماتیک ژنومی را تایید کرد. آزمایشات اختصاصیت نشان داد که هیچ گونه واکنش متقاطع در زمان استفاده از پرایمرهای اختصاصی بروسلا آبورتوس و بروسلا ملیتنسیس با یکدیگر وسایر گونههای موجود همچنین باکتری یرسینیا انتروکولتیکا وجود ندارد. یافتههای کنونی حاکی از حساسیت بالای پرایمرهای‭ab‬2 میباشد به نحوی که این پرایمرها قادر به شناسایی ‮‭400‬ ‭fg ‬ژنوم باکتری بروسلا آبورتوس میباشند که این مقدار معادل ‮‭80‬ تا ‮‭133‬ کپی از ژنوم میباشد. بنابراین استفاده از این روش جهت جداسازی و تایپینگ بروسلا آبورتوس و بروسلا ملیتنسیس به عنوان شایعترین گونههای کشور بسیار مفید میباشد. کلمات کلیدی‭: PCR‬، بروسلا ابورتوس، بروسلا ملیتنسیس، تشخیص افتراقی، ‭Real Time PCR