بررسی ایمنی زایی پپتید آنتی ژن چند اپیتوپی بر اساس ژن ‭EgA31 ‬تحریک کننده سلول های ‭T ‬بوسیله ‭RT_PCR ‬کمی

مطالعه میزان بیان ژن سایتوکاین ها در شرایط بیماری و سلامت و ارزیابی پاسخ ایمنی به برنامه های واکسیناسیون بسیار اهمیت دارد. ارزیابی سطح بیان ژن ها به روش مطلق که بر اساس رسم منحنی استاندارد با کنترل های استاندارد نتایج قابل اعتمادتری نسبت به روش های ‭relative ‬دارد. در این مطالعه حاضر سعی بر آن شد تا کنترل های مثبت به منظور رسم نمودار های استاندارد و بهینه سازی روش ‭Real time PCR‬برای ارزیابی سه سایتوکاین مرتبط به پاسخ ایمنی ‭Th‬1 ، ‭Th‬2 در مدل حیوانی (موش) طراحی و ساخته شود. بدین منظور ابتدا اقدام به ایمنی زایی ‮‭10‬ موش نژاد ‭Balb/C ‬با مایع کیست هیداتیک امولسیفای شده با اجووان فرونت سه تزریق زیرجلدی با فاصله دو هفته شد تا القا ترنسکریپشن سایتوکاین ها کرده در گروه دیگری موشها با آنتی ژن ‭ChEgA‬‮‭31‬ ایمن شدند بعد از 2 هفته پس از آخرین تزریق طحال موش ها خارج و تخلیص ‭RNA ‬انجام شد. برای هر سایتوکاین یک جفت پرایمر طراحی و سنتز شد. بخشی از سه سایتوکاین با پرایمرها از روی الگوی ‭RNA ‬خالص شده تکثیر شده بعد از خالص سازی به داخل وکتور ‭pTZ‬‮‭57‬‭T ‬کلون شدند. پلاسمید های نوترکیب برای هر سایتوکاین خالص سازی شد و غلظت های سریالی از آنها تهیه گردید. بهینه سازی شرایط برای رسم نمودار استاندارد در دستگاه ‮‭7500‬ ‭Real Time PCR ABI‬در حضور سایبر گرین انجام شد. نتایج حاصل از ایمن سازی موشها با آنتی ژن ‭ChEgA‬‮‭31‬ نشان داد که این آنتی ژن القا کننده خوبی برای اینترفرون گاما و ایمنی سلولی در موش میباشد. نتایج نشان داد که این روش حساسیتی در حدود ‮‭01.0‬ پیکوگرم معادل ‮‭150‬ کپی را دارا میباشد. این نتایج نشان میدهد که تکنیک فوق میتواند برای بررسی کمی سایتوکاین ها و بررسی پاسخ ایمنی بر علیه آنتی ژن ها مورد استفاده قرار بگیرد.