بهینه سازی شرایط کشت باکتری هموفیلوس آنفلونزا تیپ ب در فرمانتور و جداسازی تخلیص و تغلیظ ‭PRP‬

مهمترین عامل ویرولانس و ایمنی زایی باکتری هموفیلوس آنفلونزای تیپ ‭b ‬کپسول پلی ساکاریدی آن است که از پلی مر ‭(PRP) Polyribosyl ribitol phosphate ‬ساخته شده است. از آنجایی که ‭PRP ‬نقش اصلی در ویرولانس را ایفا می کند و واکسن تهیه شده بر علیه این باکتری حاوی‭PRP ‬خالص از تیپ ب است ، تهیه سوش باکتری که میزان ‭PRP ‬بالایی داشته باشد در اولویت کارهای تحقیقاتی قرار می گیرد. امروزه متدهای تولید‭PRP ‬نیاز به بهبود بخشی هستند و این نیاز هنگامی که محیط کشت انبوه است و افزایش ایمنی بیولوژیک مدنظر است بازرسی میگردد. در این طرح عناصرهای مختلف تشکیل دهنده محیط کشت که شامل اجزا اصلی، پایه و فاکتورهای رشد مانند‭(NAD (nicotinamide adenine nucleotide ‬و‭hemin ‬می باشند جهت بالابردن بیوماس و افزایش تولید‭PRP ‬مورد بررسی قرار گرفتند تا بهترین فرمول محیط کشت که دارای منبع پروتیین نیتروژن مشتمل از حدا قل یک عنصر پپتون گیاهی باشد و شرایط رشد را برای تکثیر و تولید حد اکثر ‭PRP ‬در سوش هموفیلوس انفلوانزا تیپ ب را تهیه نمود. نتایج این تحقیقات ضمن تهیه یک محیط ایده آل و ارزشمند، هزینه های تولید انبوه ‭PRP ‬جهت تولید واکسن را نیز کاهش می دهد. روشهای متعددی برای جداسازی و تخلیص پی آر پی و بهبود آن از طریق فرمانتاسیون تشریح شده است. در این پروژه تحقیقاتی ، پی آر پی (کپسول پلی ساکاریدی هموفیلوس آنفلوانزا) که از نظر ایمنی زایی فعال میباشد جدا و تخلیص شد. پی آر پی با اتانول و ستاولن (هگزادسیل تریمتیل آمونیوم بروماید) و رسوب آمونیوم سولفات تخلیص شد. آلودگی ها (اسید نوکلیک و پروتیین و اندوتوکسین ها) را به کمترین میزان رسانده که با روش دیافیلتراسیون و تغلیظ برداشته شدند. پی آر پی جدا و تخلیص شده با روشهای تجزیه ای مثل سنجش ریبوز و اندوتوکسین و همچنین تعیین آلود گی های پروتیینی و اسید نوکلیکی تخمین زده شد. کلید واژه ها ‭: PRP - ‬هموفیلوس آنفلونزای تیپ ‭b- ‬واکسن-کپسول پلی ساکاریدی-تخلیص-دیافیلتراسیون-ریبوز