طراحی پپتید آنتی ژن چند اپیتوپی بر اساس سه ژن ‭EgA31,Eg95, EgTrp ‬تحریک کننده سلول های ‭T ‬بر علیه اکینوکوک و ارزیابی پاسخ ایمنی در مدل حیوانی

در پروژه فوق ابتدا اپیتوپ های خطی غالب تحریک کننده سلول های ‭Th‬1 وابسته به پروتیین های ‭ EgTrp‬، ‭Eg‬،‮‭95‬ ‭EgA‬‮‭31‬اکینوکوکوس گرانولوزوس با نرم افزار های ‭Propred ‬و ‭IEDB‬با بهترین قدرت اتصال به مولکول های ‭MHC ‬پیش بینی شدند. سپس کدون های مناسب در نظر گرفته شده اقدام به سنتز توالی کد کننده اپیتوپها گردید، قطعه مورد نظر با ‭PCR ‬تکثیر و در وکتور‭pET‬‮‭41‬‭a+ ‬کلون شد. پروتیین کایمریک در سلول‭E.coli ‬متصل با ‭GST ‬بیان شد. بیان پروتیین با وسترن بلاتینگ تایید شد، سپس با روش افینیتی خالص سازی و به موش های 6‭/C‬‮‭57‬‭BL ‬همراه با اجوانت فروند تزریق شد. سلول های ‭splenocyte ‬طحال به مدت ‮‭72‬ ساعت در محیط ‭DMEM ‬در حضور آنتی ژن، کشت داده شدند. نتایج الایزا نشان داد که‭IFN- ‬در سلول های طحال موشهای ایمن شده با آنتی ژن گروه پروتیین کایمریک حدودا ‮‭1300‬ پیکوگرم نشان داد پروتیین چند اپیتوپی بخوبی سیستم ایمنی سلولی را تحریک کرده است. از طرفی افزایش معنی داری در میزان ‭IL‬،4 ‭IL‬‮‭10‬ مشاهده نشد. موشهای ایمن شده، با تعداد پانصد پروتواسکولکس زنده چالنج و بعد از سه ماه کیست ها شمارش شدند. مشاهدات نشان داد که آنتی ژن کایمریک تا ‮‭100-6.99‬ % در موشهای ایمن شده مصونیت ایجاد نمودند، نتایج گواه این مطلب است که پیش بینی اپیتوپ ها بر اساس متد بیوانفورماتیک جهت طراحی آنتی ژن بر علیه اکینوکوکوس گرانولوزوس مفید بوده است.