ارزیابی و تعیین شرایط رشد بهینه سلول Vero به روی میکروکریر به منظور استفاده به عنوان بستر مناسب برای تولید واکسن

لاین سلولی Vero یک تیره مداوم و منولایر بوده که توسط WHO برای تولید واکسن های ویروسی انسانی سفارش شده است. از آنجایی که تولید انبوه کشت سلولی به روش منولایر در فلاسکهای کشت سلولی بسیار پر هزینه و زمان بر بوده و نیاز به فضای کاری زیاد برای تولید دارد، علاوه بر این کنترل رشد آن بسیار مشکل بوده و به دلیل دستکاریهای زیاد خطر آلودگی بالایی دارد. در نتیجه از روشهای متفاوتی برای تولید انبوه سلول Vero در تولید واکسن استفاده میشود. در تحقیق حاضر شرایط بهینه رشد سلول Vero بروی میکروکریر به عنوان بستر مناسبی برای تولید واکسن و همچنین فاکتور های لازم و موثر در جهت افزایش تعداد سلول در واحد حجم مثل ; مقدار مناسب سایتودکس، مقدار مناسب سلول، مقدار مناسب بذر ویروس برای تعیین عیار بالای ویروس PH منا سب برای رشد ویروس و فا کتورهای لازم در ترکیب محیط کشت ، دور همزن، غلظت اکسیژن و استراتژیهای کشت پارامترهای مختلف از نظر سینتیک رشد و خصوصیات سلولهای بدست آمده مقایسه و مورد ارزیابی قرار گرفت. ، برای آنالیز داده ها از آزمون آنالیز آماری جهت بررسی معنی دار بودن اختلاف مقادیر متغیرهای مورد نظر بدست آمده از تیمارهای مختلف مثل ، از آزمون T test و محاسبه مقدار value P استفاده خواهد شد و شرایط بهینه معرفی خواهد شد. .در این تحقیق از اسپینر فلاسک با حجم کم استفاده گردید. تا بتوان در شرایط آزمایشگاهی شرایط رشد را برای رشد سلول روی سایتودکس ارزیابی نمود . بطور جدا گا نه دو حجم متفاوت از سایتودکس، mg/ml 3 و mg/ml 5 جهت بررسی تاثیر تعداد سیتودکس در چسبندگی سلول به آن اتصال، رشد و تراکم سلولی مناسب استفاده شد. تعداد سلول تلقیح شده به اسپینر فلاسک برای هر دو حجم از سایتودکس، mg/ml 3 و mg/ml 5 ، cell/ml105×3 بوده. میزان سلول بدست آمده درروز پنجم در دو حجم سایتودکس mg/ml 3 و mg/ml 5 اختلاف معنی داری داشت. تعداد سلول بدست آمده در حجم mg/ml 3 سایتودکس در 3 مرحله کشت سلول بروی میکروکریر cell/ml106×3-8/1 و در حجم mg/ml 5 سایتودکس در 3 مرحله کشت سلول بروی میکروکریر cell/ml106×5/5-2/4 برآورد شد. کشت ویروس با تلقیح بذر واکسن ویروس پولیو تیپ 1 به میزان 0.2 MOI به همراه 500 میلی لیتر محیط کشت LEV بدون سرم به کشت میکروکریر انجام شد که عیار ویروس برداشت شده براساس CCID50 log بوده و در محدوده قابل قبول قرار داشت