خالص سازی ویروس تب برفکی تولید شده در سلول BHK با استفاده از روش کروماتوگرافی ستونی

از ابزارهای مهم در کنترل بیماری تب برفکی و کاهش خسارات ناشی ازآن واکسینا سیون با واکسن مناسب می باشد . واکسن مناسب واکسنی است که عوارض جانبی نداشته باشد ، از سویه های بومی کشورتهیه شده باشد وقرابت زیادی با ویروس های شایع داشته باشد ، حتی المقدور خالص و عاری از پروتیین های غیر ساختاری باشد و بتواند ایمنی قابل قبولی در مدت معین ایجاد کند . هدف اصلی این پروژه خالص سازی ویروس تب برفکی و جدانمودن ان از پروتیین های غیر ساختاری است زیرا این پروتیین ها در ردیابی انتی بادی حاصل از واکسن با انتی بادی حاصل از بیماری اختلال ایجاد می کند و در صورت استفاده از واکسن ناخالص این تفکیک امکان پذیر نیست و نکته دیگر اینکه هرچه واکسن خالص تر باشد و دارای پروتیین های ساختاری بیشتری باشد کیفیت و کارایی واکسن بالاتر خواهد بود و اثربخشی بیشتری در پیشگیری و کنترل بیماری به همراه خواهد داشت و نیز بااین نوع واکسن خالص میتوان برنامه های مراقبتی و و کنترل بیماری را بهتر انجام داد . به منظور دستیابی به هدف اصلی ابتدا ویروس تب برفکی از تیپ O2010 در سلول مونولایر BHK به مقدار کافی تهیه شد . عیار ویروس تهیه شده با استفاده از سلول IBRS2 تعیین شد آنگاه ویروس های تهیه شده با استفاده از اولترا سانتریفوژ کنسانتره شده و عیار ویروس تعیین شد ودر 20- درجه سانتی گراد ذخیره شد .ستون کروماتوگرافی XK 16/40 با رزین های Sephacryl S500 , S400 , S300 , , Sepharose CL6B , Superdex 200 طی مراحل خاص پک و آماده سازی شد . جهت ارزیابی کارایی ستون های پک شده از دوماده Bovine Serum Albumine و Blue Dextran استفاده شد . و براساس رفتار رزین ها در تفکیک این دو ماده از یکدیگر بعضی از رزین ها جهت کار اصلی و بردن ویروس روی ان ها انتخاب شدند .به دنبال ان ویروس تب برفکی تیپ O2016 به ستون کروماتوگرافی پک شده با رزین های انتخابی تزریق شد و سپس در زمان های مختلف از خروجی ستون نمونه گیری شد و نمونه ها باروش تلقیح به سلول IBRS2 و تعیین عیار بررسی شد . درمورد بعضی از نمونه ها ازمایش Real time PCR انجام شد.در مرحله بعد یکی از فراکشن ها انتخاب و به وسیله اتیلن ایمین غیرفعال شده و یک واکسن مونووالان حاوی تیپ O2016 تهیه و به دو گروه خوکچه هندی به فواصل زمانی مختلف تزریق و خونگیری انجام و میزان انتی بادی برعلیه پروتیین های ساختاری و غیر ساختاری توسط روش هایSNT و 3ABC ELISA انجام شد