ارزیابی ایمنی زیستی گونه های پروبیوتیکی باسیلوس و انتروکوکسی با استفاده از روش های بیوشیمیایی و مولکولی

پروبیوتیک ها ارگانیسم های زنده ای هستند که با تعدیل فلور میکروبی روده، اثرات مفیدی را بر روی سلامت میزبان اعمال می کنند. مهم ترین معیار برای این باکتری های اثربخش ایمنی آن ها است. بنابراین ضروری می باشد قبل از بررسی یک سویه به عنوان پروبیوتیک از لحاظ پارامترهای بیماریزایی مورد بررسی قرار گیرند. تعدادی از گونه های انتروکوکوس و باسیلوس بومی از منابع مختلف جدا شدند و به وسیله ویژگی های فنوتیپی و تعیین توالی 16S rRNA تا سطح جنس شناسایی شدند. این باکتری های دارای خواص پروبیوتیکی به وسیله تست مقاومت در برابر اسید، مقاومت در برابر نمک های صفراوی، فعالیت ضد میکروبی و مقاومت به آنتی بیوتیک غربالگری شدند. حضور یا عدم حضور تعدادی از ژن های بیماریزایی از جمله asa1، hyl، esp، agg، gelE، cylA، cylB، cylM، efaAfm، efaAfs و ژن های مقاومت به ونکومایسین شامل vanA، vanH، vanR و vanY(در انتروکوکوس) و ژن های بیماریزای hbl, Nhe, cytK, bceT, lipA, ces (در باسیلوس )توسط PCR مورد ارزیابی قرار گرفتند. علاوه بر این فعالیت همولیتیک، DNase، لسیتیناز، لیپاز، ژلاتیناز، کوآگولاز و غیره نیز مورد تجزیه و تحلیل قرار گرفتند. در این تحقیق 11 گونه باسیلوس و 8 گونه انتروکوکوس انتخاب شدند. این سویه ها در برابر pH اسیدی و غلظت های مختلف نمک های صفراوی به صورت مقاوم ظاهر شدند. سویه ها فعالیت ضد باکتریایی قابل توجهی در برابر تعدادی از عوامل پاتوژن نشان دادند. در میان تمام سویه های باسیلوس، 7 سویه بتاهمولیتیک بوده و یکی از سویه ها(TA0049) DNase مثبت و7سویه (TA009- TA0045- TA0046 TA0056- TA0073- TA0074- TA00168) لسیتیناز مثبت بودند. دو ژن بیماریزا cytK در سویه های (TA0049- TA0056- TA0073- TA00168) وLipA در سویه های (TA0044- TA0046) دیده شدند. به منظور ارزیابی ایمنی سویه های انتروکوک، DNA سویه های انتخابی به عنوان هدف برای پرایمرهای مربوط به ژن های asa1، hyl، esp، agg، gelE، cylA، cylB، cylM، efaAfm، efaAfs و همچنین ژن های مقاومت به ونکومایسین شامل vanA, vanH, vanR, vanY قرار گرفتند. بر اساس نتایج به دست آمده، همه سویه های انتروکوک مورد آزمایش فاقد ژن های hyl، esp، agg، cylA، cylB، cylM بودند، در حالی که بسیاری از گونه ها حاوی ژن های asa1, gelE, efaAfm و efaAfs بودند. همچنین، تنها یک سویه (TA00152) دارای ژن مقاومت به vanH و vanRبود. تست لیپاز، کوآگولاز، لسیتیناز و DNase برای همه سویه ها منفی بود، در حالی که نتایج تست ژلاتیناز برای همه سویه ها مثبت بود. همه سویه ها آلفاهمولیتیک بودند. الگوی مقاومت آنتی بیوتیکی، حساسیت سویه ها به اکثریت آنتی بیوتیک ها را نشان داد. کلمات کلیدی: پروبیوتیک، باسیلوس، انتروکوکوس، ژن های بیماریزا، تعیین توالی 16S rRNA