تولید گیاه تراریخت فاقد نشانگر انتخابی با استفاده از بیان مشروط ژن ریکامبیناز در بذور تراریخت

با توجه به وجود نگرانی های متعدد در حوزه ایمنی زیستی به دلیل باقی ماندن ژنهای نشانگر انتخابی در گیاهان تراریخت و تاثیر آن بر کاهش مقبولیت محصولات تراریخت روشهای متعددی برای حذف ژنهای نشانگر از گیاهان تراریخت مطالعه شده اند که در بین آنها روشهای مبتنی بر استفاده از سیستم های نوترکیبی در جایگاه ویژه به دلیل سادگی، دقت و کارایی بالا مورد توجه می باشند. در این تحقیق پس از طراحی و ساخت ناقل خودبرش pG-synFFDD-creint-gusint کارایی آن برای تولید گیاهان تراریخت فاقد نشانگر طی یک مرحله تراریختی بررسی شده است. در ناقل مذکور از سیستم نوترکیبی در جایگاه ویژه cre/loxP متعلق به باکتریوفاژ P1 استفاده شده است و راه انداز اختصاصی بذر متعلق به ژن BcNA1 از گیاه کلزا هدایت کننده بیان ژن ریکامبیناز (cre) می باشد. به این منظور پس از انتقال ناقل مذکور به ریز نمونه های برگی تنباکو و بازیابی و تایید گیاهان تراریخت اولیه کارایی آن از طریق آنالیزهای فنوتیپی و مولکولی شامل آزمون جوانه زنی بذور،آزمون هیستوشیمیایی بیان ژن PCR ،gus و توالی یابی در گیاهان نسل T1 بررسی شد. بر اساس نتایج به دست آمده قابلیت ناقل طراحی شده برای حذف ژن نشانگر انتخابی تایید شد و درصد حذف ژن نشانگر معادل 90 تا 100 درصد برآورد شده است.

کلیدواژه ها:

گیاه تراریخت فاقد نشانگر انتخابی ، سیستم نوترکیبی cre/loxP ، ناقل خود برش