انتقال آنتی ژن سطحی ژن هپاتیت ب با روش همزدن با ذرات شیشه به ریز جلبک دونالیلا سالینا

کشاورزی مولکولی یک تکنولوژی جدید برای تولید مولکلو های آلی مثل آنتی بادی ها، واکسن ها و پروتئین های نوترکیب، در ارگانیسم های تراریخت می باشد. ریز جلبک Dunaliella salina از گروه جلبک های سبز تک سلولی متحرک و دارای هسته واقعی می باشد که به دلیل دارا بودن برخی خصوصیات از قبیل کشت ساده، عدم نیاز به محیط های کشت گرانبها و فقدان دیواره سلولی می تواند جهت تولید فرآورده های داروئی مورد استفاده قرار گیرد. در این تحقیق انتقال ژن آنتی ژن سطحی هپاتیت (HBsAG)B، جهت تولید واکسن درون ریز جلبک دونالیلا مورد بررسی قرار گرفت. برای این منظور با استفاده از بانک های اطلاعاتی ناحیه کد کننده زیرواحد کوچک آنتی ژن سطحی HBsAg مشخص گردیده و ژن تولید کننده مربوطه جهت بیان مناسب در سیستم سلولی جلبک D. salina بهینه سازی و به صورت مصنوعی ساخته گردید. ترادف فوق در ابتدا توسط هضم آنزیمی از وکتور همسانه ساز Pmk اولیه جدا و سپس جهت همسانه سازی در وکتور بیانی pCAMBIA3300 قرار گرفت. این ژن تحت کنترل پیشبردنده CaMV35S و خاتمه دهنده NOS قرار دارد. تأئید مراحل مختلف همسانه سازی با استفاده از آزمون های Colony PCR, PCR، هضم آنزیمی و تعیین ترادف صورت گرفت. انتقال ژن به جلبک D. salina با استفاده از روشهای همزدن با ذرات شیشه صورت پذیرفت. جلبک های تراریخته بر روی محیط کشت انتخابی حاوی علف کش باستا باززایی شدند. بررسی مولکولی PCR با استفاده از آغازگرهای اختصاصی بر روی DNA ژنومی جلبک های تراریخت و شاهد، انتقال ژن HBsAg را به جلبک های باززایی شده تأئید نمود.

کلیدواژه ها:

کشاورزی مولکولی ، آنتی ژن سطحی هپاتیت B ، ریز جلبک دونالیلا سالینا ، همزدن با ذرات شیشه