حذف ژن نشانگر انتخابی از پلاسمید باینری اگروباکتریومی جهت تولید گیاهان تراریخته فاقد ژن نشانگر

گرایش به توسعه سیستم های حذف نشانگر در تولید گیاهان تراریخته از اهمیت اجتناب از رها سازی ژن های مقاومت به آنتی بیوتیک در محصولات تراریخته و بار متابولیکی تحمیل شده در اثر بیان ژن های نش انگر ناشی می شود . در این تحقیق به منظور حذف ژن نشانگر انتخابیnptIIایجادکننده مقاومت به کانامایسین از پلاسمید دوگانه،pBI121 (Binaryاین پلاسمید توسط آنزیم هایNheI و ClaI مورد هضم آنزیمی قرار گرفت . پس از خروج قطعه مربوط بهnptIIبا طول1822bp قطعه مرب وط به وکتور با طولbp12938 از روی ژل آگارز جداسازی و خالص سازی شد . به منظور اتصال مجدد دو انتهای وکتور، ابتدا پایانه های چسبنده موجود در دو انتهای آن توسط تیمار با آنزیمKlenow به پایانه های صاف تبدیل شدند و سپس وکتور خطی شده در واکنش اتصال توسط آنزیم T4 DNA Ligase مجدداً حلقوی شد و تراریزش مخلوط اتصال به پلاسمیدهای مستعد تهیه شده از E. coli سویه XLI-Blue انجام گرفت