بررسی بیان ژن CIB4 در بافت های مختلف گوسفند کرمانی با استفاده از Real Time qPCR

سابقه و هدف: گوسفند کرمانی یکی از مهمترین نژادهای گوسفند بومی ایران است و به خوبی با شرایط محیطی خشن و نامطلوب قسمت جنوب شرقی کشور که آب و هوای گرم و خشک غالب است و مراتع کم و کم کیفت هستند سازگار شده است. پروتئین CIB4 یکی از اعضای خانواده پروتئین های متصل شونده به کلسیم و اینتگرین، یعنی CIB می باشد که در باروری بالا موثر است. ژن CIB4 دارای 2 ترنسکریپت L-CIB4 و S-CIB4 می باشد. تا کنون وظایف بیولوژیکی CIB4 در پستانداران به خوبی مشخص نشده، ولی اخیرا به دلیل اثر بالقوه CIB4 در افزایش باروری توجه زیادی به این پروتئین شده است. لذا، با توجه به نقش و اهمیت این پروتئین بر باروری، در مطالعه حاضر بیان این ژن در گوسفند کرمانی مورد ارزیابی قرار گرفت. مواد و روش ها: در این مطالعه بیان ژن CIB4 در بافت های مغز، قلب، شش، طحال، کلیه، کبد، تخمدان و بیضه (از هر بافت 3 تکرار) در گوسفند کرمانی (4 نر و 2 ماده) بررسی شد. در ابتدا بافت های مختلف از گوسفند تهیه و در ازت مایع به آزمایشگاه منتقل شد و سپس RNA کل از تمامی نمونه ها طبق دستورالعمل کیت استخراجOne Step RNA Reagent استخراج و cDNA با استفاده از از کیت سنتز cDNA شرکت فرمنتاز ساخته شد. پس از تکثیر ژن CIB4 و GAPDH به عنوان کنترل داخلی، نتایج منحنی های Real Time qPCR و محصولات PCR با استفاده از الکتروفورز روی ژل آگارز 2 درصد بررسی شد. نتایج: نتایج اسپکتروفتومتری بیانگر کیفیت مناسب و مطلوب RNA های استخراج شده بود و وجود دو باند 18S و 28S در RNA نشان دهنده سالم بودن RNA و عدم وجود باند اضافی نشان دهنده خلوص آن بود. مشاهده تک باند در محدوده bp574 برای برای ژن CIB4 در بافت بیضه و عدم وجود باند bp574 در بافت های دیگر و وجود باند در محدوده bp150 برای ژن GAPDH در مورد همه نمونه ها نشان داد که ژن CIB4 فقط در بیضه گوسفند کرمانی بیان می شود و در بافت های مغز، قلب، شش، طحال، کلیه، کبد و تخمدان بیان نمی شود. نتیجه گیری: با توجه به این که ژن CIB4 فقط در بیضه گوسفند کرمانی بیان می شود و در بافت های مغز، قلب، شش، طحال، کلیه، کبد و تخمدان بیان نمی شود، لذا می توان پیشنهاد کرد که این ژن در باروری قوچ ها نقش دارد. اگر چه مشخص شد که این ژن مختص بیضه است و فقط در بیضه بیان می شود، ولی برای درک مکانیسم هایی که به وسیله آنها بیان این ژن کنترل می شود باید مطالعات تکمیلی انجام شود.

کلیدواژه ها:

بیان ژن ، CIB4 ، گوسفند کرمانی ، Real Time qPCR