بررسی و شناسایی آلودگی ورتیسیلیومی در باغات زیتون شهرستان زهک با استفاده از تکنیک های nested pcrو real-time pcr

پژمردگی ورتیسیلیومی ناشی از قارچ Verticillium dahliae یکی از مهم ترین بیماری های تهدید کننده زیتون در سراسر جهان، از جمله باغات زیتون در ایران است.با توجه به توسعه اخیر کشت زیتون در منطقه سیستان این پژوهش جهت بررسی انتشار این بیماری و آلودگی درختان زیتون در منطقه سیستان انجام گرفته است.بدین منظور نمونه برداری از 20 درخت مشکوک با داشتن علائمی مانند سرخشکیدگی و ریزش برگ، از بخش های مختلف باغات زیتون پژوهشکده کشاورزی دانشگاه زابل و مرکز تحقیقات کشاورزی زهک صورت گرفت. پس از استخراج DNA آنالیز Real-time PCR با استفاده از پرایمرهای ITS اختصاصی V. dahliae انجام شد. از تعداد 20 نمونه (درخت) تست شده که از ارقام زرد، روغنی و کرونایکی بودند تعداد 12 نمونه آلودگی به V. dahliae را نشان دادند. در ادامه با هدف تعیین پاتوتایپ عامل بیماری، از پرایمرهای اختصاصی ایزوله های V. dahliae نوع D و ND برای تست Nested PCR نمونه های DNA کلی استخراج شده از 12 نمونه ی برگی درختانی که آلودگی آن ها مورد تایید قرار گرفته بود استفاده شد. نتایج نشان داد پاتوتایپ عامل بیماری از نوع ND می باشد،در انتها برای راستی آزمایی نتایج، محصول واکنش زنجیره ای پلیمراز به شرکت Macrogen کره جنوبی ارسال و توالی یابی شد و با استفاده از نرم افزار بلاست در وب سایت NCBI- Blast Search درصد تشابه توالی ناحیه مورد مطالعه در V. dahliae با توالی های ثبت شده در پایگاه NCBI تعیین شد، که اکثریت توالی های ثبت شده در سطح حدود 98 درصد بیشترین تشابه را با توالی های بدست آمده داشتند که این نتایج بر این دلالت دارد که محصولات واکنش زنجیره ای پلیمراز به درستی تکثیر شده اند.

کلیدواژه ها:

پاتوتایپ برگریز ، پاتوتایپ غیربرگریز ، واکنش زنجیره ای پلیمراز