ایجاد وبررسی پلاک های ایجاد شده سوشV4 ویروس عامل بیماری نیو کاسل توسط کشت سلولی

بیماری نیوکاسل یک بیماری ویروسی است که تقریبا درتمام گونه های پرندگان ایجاد بیماری میکند به این علت از لحاظ اقتصادی در صنعت طیور از اهمییت خاصی برخوردار است سویه های بیماری زای این ویروس میتواند در شماری از سلولهای اولیه حیوانی ویا در رده سلولی بدون تریپسین رشد کند اما سویه هایی با بیماریزایی کم این ویروس مثل V4براحتی بروی سلولها رشد نمی کند در واقع توا نا یی ویروس عامل بیماری نیو کاسل جهت ایجاد پلاک در کشتهای سلولی بستگی به بیماریزایی این ویروس دارد این تحقیق به منظور ایجاد پلاک جهت بررسی تفاوتهای مورفولوژی احتمالی پلاکها در نهایت بررسی های ملکولی درسو اولیه واکسن صورت گرفت.در ابتدا سلولهای (MDCK (Madian-Darby canine kidney بصورت استاندارد بر روی پلیتهای کشت سلولی کشت داده شد در زمانی که سلولها بصورت منولا یردر آمدند ویروس فوق بر اساس روش استاندارد به سلول ها اضافه گردید رقتهای مختلفی از ویروس براساس روش استاندارد روی پلیت های کشت سلولی حاوی سلولMDCK برده شد وبا استفاده از محیط DMEM حاوی تریپسین, سولفات منیزیوم آگار ویروس توانست بر روی سلولهای فوق تکثیر نماید ایجاد CPEودر نهایت پلاک نماید .پلاکها بعد از 72 سا عت در کشت سلولی نمایان گردیدند.پلاکهای بدست امده از نظر شکل اندازه مورد بررسی قرار گرفتند با یکدیگر مقایسه گردیدند تعداد پلاک که از لحاظ شکل واندازه تفاوت داشتند بر داشت شده جهت تکثیربه تخم مرغ جنین دارSPF تلقیح گردید. 48 ساعت پس از تلقیح انکو باسیون مایع آلانتوییک حاوی هر پلاک بطور جداگانه برداشت گردید سپس نسبت به جداسازی RNA هر پلاک اقدام شد با استفاده از پرایمر bp 362 که منطقه شکستگی Fرا در بر میگرفت نسبت به انجام RT-PCR ،اقدام گردید نتایج این تحقیق نشان دادکه بهترین پلاکها در رقت 10-5 بدست امده در رقتهای10-1 تا 10-4 به دلیل غلظت ویروسها پلاکها غیر مشخص بودند در رقتهای 10-6تا10-10 به علت رقت بالای ویروس پلاکهای واضحی بدست نیامد نتایج PCR حاصل از تمام پلاک جدا شده از کشت سلولی بر روی سلولهای MDCK نشان دهنده باند bp362 بود که در کنار نمونه مثبت مورد تایید قرار گرفت.

کلیدواژه ها:

بیماری نیوکاسل پلاک ، کشت سلولی MDCK