ردیابی و تشخیص همزمان بیماری های جاروک و لکه سبز مرکبات با روش واکنش زنجیره ای پلیمراز دوگانه

جاروک و لکه سبز مرکبات که توسط Candidatus Phytoplasma aurantifolia و Candidatus Liberibacter به وجود می آیند از مخرب ترین عوامل بیماری زا در جنوب ایران به شمار می روند. در حال حاضر هیچ روشی برای کنترل این بیماری ها معرفی نشده است. بنابراین روش های قرنطینه ای از جمله تشخیص زودهنگام درختان آلوده و امحاء آنها بسیار مهم می باشد. بدین منظور یافتن روش تشخیصی مطمین و حساس اولین گام برای جلوگیری از انتقال آلودگی به سایر نقاط توصیه می شود. روش های ردیابی زیستی عوامل بیماری زا وقت گیر بوده و نیازمند استفاده از ارقام محک است. واکنش زنجیره ای پلیمراز یک روش قدرتمند برای تشخیص مولکولی پاتوژن هاست. حساسیت و قدرت تشخیص بالا، از جمله مزیت های این تکنیک برای شناسایی عوامل بیماری زا است. روش Simplex PCR در هر واکنش تنها قادر به شناسایی یک پاتوژن است، در حالی که روش Multiplex PCR قادر است در یک واکنش آلودگی به چند پاتوژن را شناسایی کند. در این تحقیق از پرایمر A2/J5 برای شناسایی HLB و از پرایمر IMP.PET28 برای تشخیص WBDL استفاده شد. پس از الکتروفورز یک قطعه 703 جفت بازی در نتیجه تکثیر گرینینگ با پرایمر A2/J5 و یک قطعه 519 جفت بازی در اثر تکثیر جاروک با پرایمر IMP.PET28 در ژل آگاروز ظاهر گردید. همچنین در اثر تکثیر با هر دو جفت پرایمر، هر دو قطعه 703 و 519 جفت بازی در ژل آگاروز مشاهده شد. این روش در تولید گیاهان عاری از آلودگی و تشخیص سریع آلودگی برای برنامه های گواهی دهی نهال ها بسیار مفید می باشد.

کلیدواژه ها:

جاروک ، گرینینگ ، Multiplex PCR