ارزیابی فعالیت ضد قارچی اسانس رزماری (Rosmarinus officinalis) علیه آسپرژیلوس فومیگاتوس در شرایط آزمایشگاهی

مقدمه: آلودگیهای قارچی یکی از علل بروز خسارات در صنعت آبزیپروری دنیا محسوب میشود. که با توجه به آن می توان ارگانیسمهای قارچی را به عنوان یکی از عوامل اساسی تعیین کننده وضعیت بهداشتی تعیینکننده وضعیت بهداشتی آبزیان مدنظر قرار داد. اسانسهای روغنی گیاهی، ترکیبات عطری حاصل از تقطیر با بخار آب بوتهها و گیاهان دارویی هستند. رزماری گیاهی بوتهای، معطر، چوبی، چندساله و همیشه سبز با برگهای سوزنیشکل خاکستری و پوست فلسدار است. روش کار: در این مطالعه اسانس بدست آمده از گیاه رزماری جهت بررسی فعالیت ضدقارچی علیه آسپرژیلوس فومیگاتوس به روش مایکرودایلوشن براث مورد ارزیابی قرار گرفت. بدین منظور ابتدا 100 گرم برگ رزماری آسیاب و به وسیله دستگاه کلونجر اسانس آن تهیه گردید. برای مطالعه رفتار رشد قارچ مورد نظر و تعیین حداقل غلظت ممانعتکنندگی از رشد (MIC (و نیز حداقل قدرت قارچکشی (MFC (اسانس رزماری از روش های استانداردماکرودایلوشنبراث (رقیقسازی در محیط مایع) استفاده شد. برای رقتسازی در لوله، ابتدا محیط سابورو دکستروز براث به میزان 5 سیسی به 11 لوله ونوجکت اضافه شد. مقدار 100 میکرولیتر اسانس به 9/9 سیسی سابورودکستروز براث در لوله اول اضافه گردید بعد از شیکر دادن لوله، مقدار 5 سیسی از لوله اول به لوله دوم و سپس به 1 لوله بعدی و درنهایت تا لوله دهم تکرار شد در هر لوله سریالهای 2رقت لوله قبلی تهیه گردید. دو لوله هم به عنوان شاهد در نظر گرفته شد. غلظتهای به دست آمده از هر اسانس در محیط کشت سابورو دکستروز براث شامل رقتسازی (آمد دست به میلیلیتر بر میکرولیتر 0/01 و 0 /03 ،0/07 ،0/15 ،0/31 ،0/62 ،1/25 ،2/5 ،5 ،10 در سه تکرار انجام شد). برای تهیه سوسپانسیون قارچی ابتدا قارچ روی محیط کشت جامد سابورو دکستروز آگار کشت دادهشد و در دمای 25درجهی سانتیگراد به مدت 4-3 روز نگهداری شد سپس از کلنیهای رشد کرده، سوسپانسیون قارچی تهیه گردید برای این کار به سطح کلنی رشد کرده در محیط جامد، مقداری سرم فیزیولوژی اضافه و بعد از مدتی با پیپت پاستور استریل از سطح محیط برداشته شد. از کلنی خالص قارچ آسپرژیلوس فومیگاتوس ایجاد شده در محیط کشت نمونه ای تهیه گردید و به سرم فیزیولوژی دارای تویین80 اضافه شد. بعد از جداسازی اسپور، برای تهیه سوسپانسیون قارچی با استفاده از دستگاه اسپکتروفتومتر در طول موج520 نانومتر میزان عبور نور از سوسپانسیون، مورد سنجش قرار گرفت (میزان 10 اسپور قارچی در هر میلیلیتر مورد نیاز است). در نهایت 6 عبور نور 90 %برای به دست آوردن سوسپانسیونی با تقریبا به هر کدام از لوله ها مقدار 10 میکرولیتر از سوسپانسیون قارچی اضافه گردید و 24-48 ساعت در انکوباتور نگهداری شد. بعد از این مدت با روش کدورت سنجی چشمی کمترین رقتی که کدورتی در آن مشاهده نشد MIC در نظر گرفته شد و از MIC و دو رقت کمتر روی محیط سابورو دکستروز آگار کشت داده شد و بعد از انکوباسیون رقتی که هیچ گونه رشدی روی محیط جامد نداشت به عنوان MFC به دست آمد. حداقل غلظت ممانعت کننده از رشد (MIC (و حداقل قدرت قارچکشی (MFC (اسانس رزماری به ترتیب 36/0±83/0 و 72/0±08/2 میکرولیتر بر میلیلیتر اندازه گیری گردید. بحث و نتیجه گیری: نتایج این تحقیق حاکی از تاثیر اسانس رزماری بر روی قارچ مورد آزمایش بود.

کلیدواژه ها:

اسانس رزماری ، آسپرژیلوس فومیگاتوس ، ماکرودایلوشن براث