جداسازی اسپرم های منجمد حاصل کروموزوم x و y گاومیش با روش شیب غلظت وارزابی آن با روش هیبرید کردن در جابا ماده فلورسنت

زمینه مطالعه: تعیین حنسیت اسپرم یکی از راه های مهم پیش انتخاب جنسی نتاج است که به همراه تلقیح مصنوعی، توانایی قابل توجهی برای بهبود روند اصلاح نژاد دام ها دارد. هدف: هدف از انجام این تحقیق ارزیابی شیب غلظت ناپیوسته Allgrad در جداسازی اسپرمهای گاومیش بر اساس کروموزوم های جنسی به روش هیبرید کردن فلورسنت در جا (FISH) بود. روش کار: جهت جداسازی اسپرم های حاوی کروموزوم های جنسی و منی منجمد گاومیش پس از ذوب به روش شیب غلظت ستونی از غلظت نامتناوب 4 لایه ای از غلظت 65 تا 95 و با اختلاف 10 درصد بین لایه های متوالی با استفاده از محیط تهیه گردید. نمونه اسپرم پس از ذوب بر روی اولین لایهتیوپ قرار گردید تا اسپرماتوزوئیدهای با چگالی مشابه را پس از سانتریفیوژ در یک سطح جمع آوری و استخراج نماید. از روش باپروب رنگی تهیه شده گاوی برای تمایز اسپرم ها در محیط های تفکیکی استفاده گردید. شمارش اسپرماتوزوئیدها بر حسب وجود سیگنال های رنگی قرمز و سبز که به ترتیب معرف اسپرم های حامل کروموزوم های و بود صورت گرفت. نتایج: بر اساس نتایج بدست آمده اختلاف معنی داری در تعداد اسپرم های با کروموزوم های X در محیط مایع جدا شده از لایه تحتانی نسبت به فوقانی (78/3 در مقابل 21/7 درصد) گزارش گردید (P<0/05). از سوی دیگر در تمامی نمونه های تحت آزمایش تعداد اسپرماتوزوئیدهای با کروموزوم های در مایع جدا شده از لایه فوقانی (75/5 در مقابل 24/5 درصد) بیشتر بود (P<0/05). نتیجه گیری نهایی: به طور کلی نتایج تحقیق حاضر نشان داد استفاده از ستون نامتناوب چهار لایه ای محیط Allgrad یک روش مطمئن جداسازی اسپرماتوزوئیدها منی منجمد پس از ذوب گاومیش می باشد.

کلیدواژه ها:

اسپرمف انتخاب جنسیت ، گرادیان Allgrad ، گاومیش