سنجش ایمنی وابسته به سلول به روش (LPA)MTT برای نخستین بار در کشور

هدف:از آنجایی که امروزه به اهمیت نقش ایمنی وابسته به سلول در ایجاد محافظت ، بیش از گذشته واقف می باشیم ، لزوم اطلاع از سطح محافظتی که واکسیناسیون مستقل از پاسخ پادتن می تواند ایجاد کند اهمیت می یابد. مطالعه تاثیر هریک از واکسن های موجود که به گروههای متفاوتی از نظر حدت تعلق دارند بر تحریک ایمنی وابسته به سلول می تواند با میزان محافظتی که این واکسن ها ارائه می دهند مربوط باشد.در این صورت ممکن است ارزیابی پاسخ پادتن به عنوان تنها راه بررسی پاسخ واکسن توسط روشهای دیگر تکمیل شود. مواد و روش کار: بدین منظور تعداد 200 قطعه جوجه گوشتی به صورت تصادفی به 4 گروه (A-B-C-D ) تقسیم و هر گروه به محلی جداگانه ،انتقال یافت .پس از محاسبه روز واکسیناسیون علیه بیماری گامبورو به روش دونتر،واکسیناسیون هر گره با توجه به حدت واکسن مربوطه ،در زمان مقرر صورت پذیرفت .گروه A نیز به عنوان گروه کنترل تلقی گردید.از گروه های 4گانه در نوبت های 1-7-14-21-28-35-42روزگی خونگیری به عمل آمده و آزمون (LPA)MTT در خصوص آنها صورت پذیرفت .نتایج بدست آمده از گروه های مختلف با روشهای آماری با یکدیگر مقایسه شد. نتایج و بحث : MTT زرد یا 4/5 دیمتیل دیازول تترازولیوم بروماید و تترازول در میتوکندری سلولهای زنده تبدیل به فورمازون بنفش می شود. مقدار جذب این محلول رنگی می تواند با اندازه گیری در یک طول موج مشخص توسط اسپکتروفتومترتعیین گردد. این تبدیل فقط زمانی اتفاق می افتد که آنزیم میتوکندریال ردوکتاز فعال باشد. از این رو این تبدیل می تواند مستقیما به سلولهای زنده مربوط باشد. رنگ محلول MTT حل شده در محیط کشت بافت یا محلولهای موازنه شده نمکی ، بدون فنولرد، مایل به زرد است . دهیدروژنازهای میتوکندری سلولهای زنده، حلقه تترازولیوم ایجادکننده کریستالهای فورمازون MTT ، که در محلولهای آبی حل نشدنی هستند، را جدا می کنند. این کریستال ها می توانند در ایزوپروپانول اسیدی شده، حل شوند و محصول بنفشی تولید کنند که توسط اسپکتروفوتومتر اندازهگیری شود. افزایش در تعداد سلولها باعث افزایش در میزان فورمازون تولید شده و در نتیجه افزایش در جذب نوری می شود. مطالعه ی حاضر در set up کردن آزمونی مناسب جهت ارزیابی عملکرد واکسن های مختلف برتحریک ایمنی وابسته به سلول موفق بود.