تشخیص مولکولی کاندیدیازیس

سال انتشار: 1389
نوع سند: مقاله کنفرانسی
زبان: فارسی
مشاهده: 197

نسخه کامل این مقاله ارائه نشده است و در دسترس نمی باشد

استخراج به نرم افزارهای پژوهشی:

لینک ثابت به این مقاله:

شناسه ملی سند علمی:

THVC16_1136

تاریخ نمایه سازی: 11 اردیبهشت 1398

چکیده مقاله:

یکی از مشکلات مدیریت عفونت های قارچی تشخیص سریع بیماری های قارچی در مراحل اولیه است.گاهی تنها علامت یک عفونت قارچی مهاجم تب طولانی است که به درمان آنتی بیوتیکی پاسخ نمی دهد. یکی از مهمترین معمول ترین روشهای مولکولی برای تشخیص گونه های مختلف کاندیدا روش PCR است.بررسی پلی مورفیسم در توالی( ITS (Internal Transcribed Spacer در ژنهای rRNA یک روش معمول برای تشخیص تفریق این قارچهاست. نکته دیگر قابل توجه در روشهای مولکولی تشخیص کاندیدا استفاده از آلبومین سرم گاوی به میزان %0,5در نمونه های PCR شده می باشد.هدف پژوهشگران از این کار حذف اثر مهارکننده ها افزایش حساسیت آزمایش گزارش شده است.نمونه های مورد استفاده برای این روش می تواند شامل خون,بافت تازه یا منجمد,بیوپسی یا حتی بافت های فیکس شده در فرمالین باشد.از سایر روش ها می توان به PCR-RFLP( Polymerase (chain Reaction-Restriction Fragment Length Polymorphism اشاره کرد که در این روش از پرایمرهای universal برای تکثیر ناحیه ITS1-ITS4 استفاده گردید.سپس با آنزیم محدود کننده MSPI این ناحیه هضم شد محتویات روی ژل الکتروفورز رانده شد تا گونه های کاندیدا آلبیکنس,گلابراتا,کروسی,تروپیکالیس گویلروموندی تشخیص داده شوند.در ژل الکتروفورز DNA ریبوزومال گویلروموندی سه باند مابقی کاندیداها دو باند را ایجاد کردند.یک روش سریع ممکن دیگر ,استفاده از روش Real time PCR به همراه پرایمرهای اختصاصی رنگ های غیر اختصاصی Sybergreenمی باشد.در این روش ابتدا ناحیه بسیار متغیر ITS تکثیر شده سپس نقطه ذوب با کمک رنگ های Sybergreenو فلورسانت غیر اختصاصی محاسبه می شود.بدین صورت که در نقطه ذوب پرایمرهای کونژوگه شده با رنگ, از مولکول مکمل خود جدا شده در حین جدا شدن نوری را ساتع می کنند که ردیابی می شود نقطه ذوب بدست می آید.که نقطه ذوب برای کاندیدا آلبیکنس دوبلیننسیس به ترتیب 77,2و76,9محاسبه شده است. برخی محققان نوعی کیت تجاری برای تشخیص کاندیدا آلبیکنس در موارد واژینیت ارایه دادند.اساس این کیت آگلوتیناسیون ذرات مخمر با استفاده از آنتی بادی اختصاصی بوده قادر است مقادیر بیش ازCFU/ml 106×1 از کاندیدارا تشخیص دهد.این متد برای کاندیدا آلبیکنس اختصاصی بوده با سایر میکروارگانیسم ها واکنش متقابل ندارد.

کلیدواژه ها:

نویسندگان

زهرا نوری

دانشکده دامپزشکی دانشگاه فردوسی مشهد

حمیدرضا موسویان

دانشکده دامپزشکی دانشگاه فردوسی مشهد