تخلیص و تعیین خصوصیت بیوشیمیایی آنزیم آلفا آمیلاز نمک دوست توسط باکتری باسیلوسبومی جدید

آلفا آمیلازها از مهمترین آنزیم ها به شمار می آیند و اهمیت فراوانی در بیوتکنولوژی امروزی ایفا می کنند. در این مطالعه سویه باکتریایی مقاوم به نمک توانایی تولید آلفا آمیلاز خارج سلولی را دارا بود. در ادامه با استفاده از آنالیز Rdna 16S و با رسم درخت فیلوژنتیکی جایگاه این سویه در مقایسه با سایر باسیلوس های شناخته شده تعیین شد. مطالعات تعیین توالی نشانگر شباهت بالای سویه با سویه Bacillus sp بود. با استفاده از کروماتوگرافی تعویض یونی و بکار بردن ستون Q-sepharose آلفا آمیلاز حاصل خالص و سپس تعیین خصوصیت گردید. فعالیت آنزیمی به کمک روش Bernfeld در حضور بافر تریس mM 50 تعیین شد. این آنزیم برای فعالیت به کلسیم نیاز ندارد. دما و pH بهینه این آنزیم به ترتیب 50 درجه سانتی گراد و 7/4 بود. الکتروفورز با SDS- PAGE باندی را با وزن مولکولی 58 کیلودالتون نشان داد. فعالیت این آنزیم در حضور درصدهای مختلف نمک مثل کلرید سدیم و کلرید منیزیم بررسی شد. آنزیم در حضور mM 60 از کلرید سدیم بطور میانگین تا % 70 از فعالیت خود را کاملا حفظ کرده و در حضور mM 40 از کلرید منیزیم % 67 از فعالیت در آنزیم باقی ماند. پایداری حرارتی آنزیم در حضور کلسیم ، کلرید سدیم و کلرید منیزیم بررسی گردید. این آنزیم در حضور یون های منگنز و آلومینیوم دچار کاهش فعالیت گردید، در حضور یون باریوم و لیتیوم تغییر شاخصی در فعالیت مشاهده نمی شود.

کلیدواژه ها:

باکتری هالوفیل ، آلفا آمیلاز ، تخلیص