طراحی و ساخت کاست RNAi قدرتمند وموثر برای غلبه بر ژن آلفاگلیادین

گلوتن یکی از مهمترین پروتئین های گندم است.گلوتن گندم به دوخانواده پروتئینیتقسیم میشود: گلوتنینها وگلیادینها. بیماری سلیاک بیماری عدم تحمل گلوتن است. افراد مبتلا به بیماری سلیاک نمیتوانند پروتئین گلوتن را که ترکیبی از دوپروتئین گلیادین و گلوتنین است تحمل کنند. در گندم، پروتئین اصلی ایجادکننده حساسیت، زیرواحدی از گلیادین به نام آلفا گلیادین می باشد. آلفاگلیادین فراوانترین پروتئین دانه گندم است. از روشهای موثر پیشرو در رفع مشکلات ناشی از این پروتئینهای حساسیت زا ، فناوری RNAi است که برای خاموشی یا کاهش بیان ژن به کارگرفته میشود. درتحقیق حاضرابتدا از طریق بانکهای اطلاعاتی DNA ، توالی ژن α گلیادین درگیر درسنتز پروتئین های حساسیتزا مورد بررسی قرارگرفت -و برای تکثیر اختصاصی آن، آغازگرهای موردنیاز با استفاده از نرم افزار پرایمر بلاست طراحی گردید وبرای سنتز سفارش دادهشد. بعداز تکثیر قطعات ژنی و خالص سازی از ژل آگارز، قطعات به وکتور pTG19 متصل وبعد از همسانه سازی توسط باکتری E.coli ، توالی یابی گردید و پس از اطمینان از صحت توالی همسانه سازی شده، اقدام به ساخت سازه موثر RNAi گردید. سازه مذکور شامل دو قطعه ژنی α گلیادین با دو طول متفاوت میباشد که به طور معکوس در داخل وکتور قرار گرفته -و ساختار RNAi مورد نظر را ایجاد میکنند. در طراحی ساختار کاست موردنظر برای ژنهای آلفا گلیادین، مواردی اعمال شد تا قدرت اثر گذاری آن برژنهای هدف در حداکثر میزان باشد. پس از دستیابی به وکتور مورد نظر کلیه ژنهای هدفگیری شدهاز طریق مطالعات insilico بررسی گردید. نتایج حاصله نشان داد که ساختار ژن آلفا گلیادین واریته گندم مورد استفاده )رقمآریا( شباهت بسیار زیادی با ساختار ژن های آلفا گلیادین در ارقام و حتی گونه های دیگر غلات دارد و کاست طراحی شده RNAi می تواند دارای کاربرد موثری در کنترل بیان ژن آلفا گلیادین درتمام گونه های بررسی شده باشد

کلیدواژه ها:

آلفاگلیادین ، سلیاک ، سازه RNAi ، گندم