از گیاه برنج ltp جدا سازی، همسانه سازی و بیان پروکاریوتی ژن

پروتئین های ناقل لیپید ،(Lipid Transfer Protein = LTP) پروتئین های کوچک با وزن مولکولی 7 تا 10 کیلودالتون می باشند که در مکانیسم دفاعی گیاهان مختلف، نقش ضد قارچی دارند. پروتئین های ضد قارچی به علت پتانسیل زیادشان درltp محافظت از محصولات در برابر تهاجم قارچ و در نتیجه اهمیتشان در اقتصاد مورد توجه هستند. در این تحقیق، جداسازی ژن از ژنوم گیاه برنج و کلون کردن آن در وکتور بیانی و مطالعه بیان آن گزارش شده است. بدین منظور با طراحی پرایمرهای مناسب، از ژنوم گیاه برنج استخراج گردید. ژن استخراج شده با هظم آنزیمی مورد تایید قرار گرفت. سپس PCR با استفاده از روش ltp ژن پس از pET-24FZ همسانه سازی شد. سازه ی نوترکیب بدست آمده با نام pET-24 d (Novagen) این ژن به درون وکتور بیانی با پرایمرهای اختصاصی ژن و پرایمرهای وکتور و نیز تعیین توالی مورد تایید PCR انتقال به میزبان پروکاریوتی به کمک الگوی 1 به محیط کشت باکتری میزبان صورت گرفت. mM در غلظت نهایی IPTG با اضافه کردن LTP قرار گرفت. القای بیان پروتئین و زمان القا سنجیده شد IPTG میزان بیان در شرایط مختلف دما، غلظت SDS-PAGE با بررسی پروتئین تام باکتری بر روی ژل تا شرایط بهینه ی بیان بدست آید. مراحل bioassay این پروتئین در دست انجام می باشد.

کلیدواژه ها:

Antifungal peptide ، Lipid transfer proteins ، بیان پروکاریوتی