شناسایی کریپتوسپوریدیوم پارووم با روش PCR و تعیین الگوی پروتئینی و آنتی زن های ایمونوژنیک آن

کریپتوسپوریدیوم تک یاخته ای از شاخه اپی کمپلکسا است که در بسیاری از حیوانات و ا نسان موجب اسهال می شود. از آنجای که این تک یاخته خسارات اقتصادی قابل توجهی به صنعت دامپروری ایران وارد می سازد، شناسایی مولکولی تک یاخته و تعیین الگوی پروتئینی و آنتی زن های امیونوژنتیک آن هدف این مطالعه می باشد. در این مطالعه از مدفوع اسهالی گوساله مشکوک به کریپتوسپوریدیوز پس از تشخیص میکروسکوپی اوسیستهای کریپتوسپوریدیوم جدا سازی و تخلیص شد. استخراج DNA از اووسیستها انجام پذیرفت و با پرایمرهای اختصاصی منشعب از ژن ribosomaIRNA18S کریپتوسپوریدیوم پاروم با روش Semi-nested PCR اختصاصی بودن اووسیستهای کریپتوسپوریدیوم پارووم تأیید گردید. یک راس گوساله سرم منفی از نظر آنتی بادیهای ضد کریپتوسپوریدیوم با 5x610 اووسیست کریپتوسپوریدیوم تخلیص شده به طریق تجربی آلوده شد. 5 روز بعد اووسیستها از مدفوع جمع آوری و تخلیص گرید. پس از جداسازی و تخلیص، تعیین الگوی پروتئینی با استفاده از روش SDS-PAGE انجام پذیرفت. باندهای پروتئینی اسپروزوئیتها در محدوده ای بین 10 تا 100 کیلو دالتون قرار گرفتند. ده باند قابل تشخیص در محدوده 20 تا 40 کیلو دالتون قرار گرفت. در محدوده 40 تا 70 کیلو دالتون شش باند قابل رویت بودند. شناسایی پروتئینهای ایمونوژنیک با روش وسترین بلات انجام پذیرفت. باندهای ایمنوژنیک در محدوده ای بین 17 تا 260 کیلو دالتون مشاهده شد که وزن مولکولی نسبی سه باند آن در محدوده 20 تا 30 کیلو دالتون، سه باند در محدوده 30 تا 40 کیلو دالتون، سه باند در محدوده 40 تا 60 کیلو دالتون، و دو باند در محدوده 80-70 کیلو دالتون و چهارباند سنگین به اندازه نسبی 130، 170، 216 و 257 کیلو دالتون بودند.

کلیدواژه ها:

کریپتوسپوریدیوپارووم ، ایمنوبلات ، Seminested-PCR ، PCR ، SDS-PAGE