ساخت سازه بیانی گیاهی حاوی ژنهای2pgip و 42 chit بهصورت توأم

پاتوژنهای قارچی با گسترش وسیع و سریعی که دارند خسارات فراوانی را به محصولات کشاورزی وارد میکنند. یکی از روشهای مبارزه با بیماریهای قارچی استفاده از مهندسی ژنتیک برای انتقال ژنهای رمزکننده آنزیمهای هیدرولازی از قبیل کیتینازها و ژنهایمهاری آنزیمهای پکتینازی قارچی از قبیل پروتئین مهارکننده آنزیم پلیگالاکتوروناز، به گیاهان زراعی میباشد. در این تحقیق از ژنهای کیتینازchit42 حاوی دمین متصلشونده به کیتین) و 2pgipبهترتیب جدا شده از قارچTrichoderma atrovirideو گیاهPhaselus vulgaris جهت ساخت سازه بیانی گیاهی واجد هر دو ژن مذکور تحت کنترل پروموترCaMV 35Sو ترمیناتور نوپالین سینتازNOS بهصورت جداگانهpBIMZ2 استفاده شده است. برای این منظور ابتدا ژن 42 chitتوسط آغازگرهای اختصاصی دو طرف سازه حاوی جایگاه آنزیمیEcoRIتکثیر و در ناقل pJETهمسانهسازی شد. سپس این سازه به روش هضم آنزیمی به صورت خطی در آمده و در جایگاه EcoRIناقلPBI121حاوی ژن(pBIAH23) pgip2 همسانهسازی شد. ناحیه اضافی به روش هضم بخشی جدا شد و در نهایت برای تأیید سازهpBIMZ2 از روشهایPCRالگوی هضم آنزیمی وreplica platingاستفاده شد که در هر سه روش حضور ژنchit42 به طول 1497 جفتباز وpgip2 به طول 1002 جفتباز تأیید شد. از سازههای ساخته شده در این تحقیق میتوان برای پروژههای انتقالژن به گیاهان مدل و زراعی برای بررسی اثرات توأم این ژنها و تولید گیاهان تراریخت مقاوم در برابر قارچها استفاده کرد

کلیدواژه ها:

سازهی بیانی گیاهی ، ، pgip 2 ، chit42 ، دمین متصل شونده به کیتین ، روشreplica plating