تکثیر و کلونینیگ و بیان ژن S۲ کروناویروس در باکتری Lactococcus lactisبه منظور طراحی واکسن های نوترکیب

زمینه و هدف: همه گیری گسترده و تداوم کووید-۱۹، ناشی از SARS-CoV-۲، یک تهدید جدی برای عموم مردم جهان است و همچنان تهدیدی برای سلامتی عموم و بار سنگینی بر کل جامعه بشری تحمیل می کند. در حال حاضر، چندین واکسن عضلانی با موفقیت ساخته شده است و واکسیناسیون انبوه در بسیاری از کشورها پیشرفت کرده است. اغلب شواهدی در مورداستفاده از پروبیوتیک های نوترکیب، به ویژه باکتری های اسیدلاکتیک (LAB) به عنوان حامل واکسن ارائه می گردد. باتوجه به نقش حیاتی گلیکوپروتئین SARS-CoV-۲ spike (S) در اتصال ویروس، ورود و القای آنتی بادی های خنثی کننده، پروتئین S به طور گسترده به عنوان هدفی برای ساخت واکسن مورداستفاده قرار گرفته است. در این پژوهش تلاش بر این بوده است که ژن S۲ زیر واحد اسپایک در باکتری Lactococcus lactis کلون و بیان شود. روش ها: در این مطالعه، ژن S۲ که در پژوهش قبلی تکثیر و در پلاسمید PWPI کلون شده بود مورد استفاده قرار گرفت، این با واکنش PCR تکثیر و پس از جداسازی ژن در پلاسمید واسط PJET-۱.۲blunt کلون و برای نگهداری بهتر به باکتری E.Coli DH۵α منتقل شد سپس ژن S۲ از پلاسمید PJET-۱.۲blunt بریده، در پلاسمید PNZ۸۱۴۹ کلون و برای تکثیر و بیان پلاسمید کلون شده به باکتری Lactococcus lactis سویه NZ۳۹۰۰۰ منتقل شد. یافته ها: با توجه به یافته های پژوهش، ژن S۲ با سایز ۱۴۳۲bp بخوبی تکثیر و جدا سازی و در پلا سمید pNz۸۱۴۹ کلون و پس از انتقال به باکتری L.lactis NZ۳۹۰۰۰ بیان شد پروتئین S۲ در اندازه۵۱ کیلودالتون بر روی ژل SDS-PAGE مشاهده شد. نتیجه گیری: با توجه به نتایج بدست آمده، انتقال ژن ویروس های بیماریزا به باکتریهای سودمند روده ای (LAB) می توانند به عنوان حامل وکاندید واکسن خوراکی باشند.

کلیدواژه ها:

COVID-۱۹ ، SARS-CoV-۲ ، Gene Expression ، Recombinant Protein ، Cloning ، S۲ Gene ، کووید-۱۹ ، SARS-COV-۲ ، بیان ژن ، پروتئین نوترکیب ، کلون سازی ، ژن S۲