راه اندازی پانل تشخیصی سنجش بار ویروسی و وضعیت فیزیکی ژنوم ویروس پاپیلومای انسانی تیپ ۱۶ به روش Multiplex Real-Time PCR

مقدمه: افزایش بار ویروسی در زنان با عفونت مزمن ویروس پاپیلومای انسانی تیپ ۱۶ (Human Papilloma Virus ۱۶) و الحاق ژنوم ویروس در کروموزم سلولی با افزایش شیوع ضایعات پیش بدخیم/بدخیم در دهانه رحم مرتبط است. در این مطالعه مراحل راه اندازی پانل تشخیصی سنجش بار ویروسی و وضعیت فیزیکی ژنوم HPV۱۶ بر روش Multiplex Real-Time PCR تشریح شده است.مواد و روش ها: در این پژوهش یک ناحیه محافظت شده از ژن های E۶ و E۲ ویروس HPV۱۶ پس از استخراج از رده سلولی CaSki و تکثیر با روش PCR در پلاسمید باکتریایی pJET۱.۲/blunt cloning vector کلون شده و همراه با پلاسمید نوترکیب حاوی ناحیه محافظت شده از ژن سلولی RnaseP به عنوان استاندارد جهت سنجش کمی میزان بار ویروسی به صورت کپی در هر سلول و در نهایت تعیین وضعیت فیزیکی ژنوم ویروس با روش Multiplex Real-Time PCR مورد استفاده قرار گرفت.نتایج: در نتایج Real Time PCR شاخص های اختصاصیت، ضریب R۲، شیب و کارایی در محدوده معیارهای پذیرش قرار داشته که نشان می دهد ژن های E۲ و E۶ ویروس HPV۱۶ و ژن سلولی RnaseP با خطی بودن خوب شناسایی می شوند. نتایج نسبت E۲/E۶ در سلول های CaSki در مطالعه حاضر (E۲/E۶ ratio=۰.۱۵) بیانگر حضور ترکیبی از ژنوم های اپیزومال و الحاق شده (Mixed) در این رده سلولی بود.نتیجه گیری: نتایج به دست آمده در این مطالعه نشان می دهد پانل تشخیصی طراحی شده برای سنجش بار ویروسی و وضعیت فیزیکی ژنوم HPV۱۶ بر روش Multiplex Real-Time PCR از خطی بودن، حساسیت و اختصاصیت مناسبی مطابق معیارهای پذیرش از پیش تعیین شده برخوردار بود.مقدمه: افزایش بار ویروسی در زنان با عفونت مزمن ویروس پاپیلومای انسانی تیپ ۱۶ (Human Papilloma Virus ۱۶) و الحاق ژنوم ویروس در کروموزم سلولی با افزایش شیوع ضایعات پیش بدخیم/بدخیم در دهانه رحم مرتبط است. در این مطالعه مراحل راه اندازی پانل تشخیصی سنجش بار ویروسی و وضعیت فیزیکی ژنوم HPV۱۶ بر روش Multiplex Real-Time PCR تشریح شده است. مواد و روش ها: در این پژوهش یک ناحیه محافظت شده از ژن های E۶ و E۲ ویروس HPV۱۶ پس از استخراج از رده سلولی CaSki و تکثیر با روش PCR در پلاسمید باکتریایی pJET۱.۲/blunt cloning vector کلون شده و همراه با پلاسمید نوترکیب حاوی ناحیه محافظت شده از ژن سلولی RnaseP به عنوان استاندارد جهت سنجش کمی میزان بار ویروسی به صورت کپی در هر سلول و در نهایت تعیین وضعیت فیزیکی ژنوم ویروس با روش Multiplex Real-Time PCR مورد استفاده قرار گرفت. نتایج: در نتایج Real Time PCR شاخص های اختصاصیت، ضریب R۲، شیب و کارایی در محدوده معیارهای پذیرش قرار داشته که نشان می دهد ژن های E۲ و E۶ ویروس HPV۱۶ و ژن سلولی RnaseP با خطی بودن خوب شناسایی می شوند. نتایج نسبت E۲/E۶ در سلول های CaSki در مطالعه حاضر (E۲/E۶ ratio=۰.۱۵) بیانگر حضور ترکیبی از ژنوم های اپیزومال و الحاق شده (Mixed) در این رده سلولی بود. نتیجه گیری: نتایج به دست آمده در این مطالعه نشان می دهد پانل تشخیصی طراحی شده برای سنجش بار ویروسی و وضعیت فیزیکی ژنوم HPV۱۶ بر روش Multiplex Real-Time PCR از خطی بودن، حساسیت و اختصاصیت مناسبی مطابق معیارهای پذیرش از پیش تعیین شده برخوردار بود.

کلیدواژه ها:

ویروس پاپیلومای انسانی تیپ ۱۶ ، بار ویروسی ، واکنش زنجیره ای پلیمراز در زمان واقعی ، کلونینگ مولکولی.