همسانهسازی ژن FRY1 در وکتور بیانی pET

سال انتشار: 1391
نوع سند: مقاله کنفرانسی
زبان: فارسی
مشاهده: 975

متن کامل این مقاله منتشر نشده است و فقط به صورت چکیده یا چکیده مبسوط در پایگاه موجود می باشد.
توضیح: معمولا کلیه مقالاتی که کمتر از ۵ صفحه باشند در پایگاه سیویلیکا اصل مقاله (فول تکست) محسوب نمی شوند و فقط کاربران عضو بدون کسر اعتبار می توانند فایل آنها را دریافت نمایند.

استخراج به نرم افزارهای پژوهشی:

لینک ثابت به این مقاله:

شناسه ملی سند علمی:

AGRIBIOTECH03_397

تاریخ نمایه سازی: 27 تیر 1392

چکیده مقاله:

ژن FRY1 FIERY1 در گیاه آرابیدوپسیس یک ژن واکنشگر به تنشهای غیر زیستی بوده و آنزیم اینوزیتول فسفات- 1- فسفاتاز را کد میکند. از جمله نقشهای مهم آنزیم FRY1 تجزیهی پیامبر ثانویهی اینوزیتول 1 و 4 و 5 تری فسفات IP3 و تغییر درمیزان Ca+ 2 سیتوزول میباشد. از دیگر فعالیتهای آنزیم FRY1 میتوان به تجزیهی PAP که در فرایند خاموشی ژن در سلول نقش دارد اشاره نمود. لذا آنزیم FRY1 از اهمیت ویژهای در مطالعهی سیستم های پیامرسانی سلول برخوردار است. هدف از این تحقیق، همسانهسازی ژن FRY1 در سیستم بیانی pET به منظور بررسی فعالیت آنزیمی آن در شرایط invitro است. لذا از بافتهای رویشی گیاه آرابیدوپسیس RNA استخراج و پس از ساخت cDNA نسخهی cDNA ژن FRY1 ا پرایمرهای اختصاصی 5-GCTTGACATATGATGTCTATCAATTGTTTTCG-3' حاوی جایگاه برشی NdeI و -GCGGCCGCTCAGAGAGCTGAAGCTTTCTCTTG-3' 5 با جایگاه برشی NotI تکثیر شد. محصول PCR در وکتور pTG19-T وارد پلاسمید نوترکیب pTG19-T:FRY1 اقدام به برش آن با آنزیمهای NdeI و NotI و جداسازی FRY1 گردید. پس از خالصسازی نسخهی cDNA ژن FRY1 ز ژل آگارز، این قطعه در وکتور بیانی pET28a وارد گردید و به باکتری E.coli(DH5α انتقال داده شد. پس از همسانهسازی و استخراج پلاسمید نوترکیب pET28a:FRY1 به منظور تایید حضور نسخهی cDNA ژن FRY1 در سازهی ژنی فوق از 2 روش برش آنزیمی با استفاده از آنزیمهای BamHI و NdeI-NotI و توالییابی قطعهی مورد نظر استفاده شد. سپس سازهی نوترکیب pET28a:FRY1 جهت بیان مضاعف پروتئین FRY1 به باکتری BL21(DE3) انتقال یافت.

نویسندگان

تقی موذنزاده

دانشجوی کارشناسی ارشد بیوتکنولوژی، دانشکدهی کشاورزی، دانشگاه گیلان

رضا شیرزادیان خرمآباد

استادیار گروه بیوتکنولوژی، دانشکدهی کشاورزی، دانشگاه گیلان

رضا حسن ساجدی

استادیار گروه بیوشیمی، دانشکده علوم زیستی، دانشگاه تربیت مدرس

محمد مهدی سوهانی

استادیار گروه بیوتکنولوژی، دانشکده کشاورزی، دانشگاه گیلان

مراجع و منابع این مقاله:

لیست زیر مراجع و منابع استفاده شده در این مقاله را نمایش می دهد. این مراجع به صورت کاملا ماشینی و بر اساس هوش مصنوعی استخراج شده اند و لذا ممکن است دارای اشکالاتی باشند که به مرور زمان دقت استخراج این محتوا افزایش می یابد. مراجعی که مقالات مربوط به آنها در سیویلیکا نمایه شده و پیدا شده اند، به خود مقاله لینک شده اند :
  • Allen, G.J., Muir, S.R., Sanders, D, 1995. Release _ individual ...
  • Dichtl, B., Stevens, A. and Tollervey, D. (1997) Lithium toxicity ...
  • Kim, B.H., Von Arnim, A.G., 2009. FIERY1 regulates light-mediated repressionof ...
  • Lo rpez-Coronado, J. M.. Belle s, J. M., Lesage, F., ...
  • Peltier, J. B., Cai, Y., Sun, Q., Zabrouskov, V., Giacomelli, ...
  • Quintero, F. J., Garciadelblas, B., Rodrig uez-Navarro, _ 1996. The ...
  • Candela, H., Cnops, G., Alonso-peral, M. _ Anami, S., Falcone, ...
  • Arabidopsis. Plant Physiology. Vol. 152, pp. 1357-1372. ...
  • Xiong, L., Lee, B. H., Ishitani, M., Lee, H., Zhang, ...
  • نمایش کامل مراجع