کلونیگ، بیان و تخلیص آنتی ژن نوترکیب 6-ESAT مایکوباکتریوم توبرکلوزیس جهت استفاده در تشخیص بیماری سل
صاحب اثر: سازمان تحقیقات، آموزش و ترویج کشاورزی
نوع محتوی: طرح پژوهشی
زبان: فارسی
استان موضوع گزارش: البرز
شهر موضوع گزارش: کرج
شناسه ملی سند علمی: R-1092723
تاریخ درج در سایت: 27 بهمن 1397
دسته بندی علمی: علوم کشاورزی
مشاهده: 234
تعداد صفحات: 38
سال انتشار: 1391
نسخه کامل طرح پژوهشی منتشر نشده است و در دسترس نیست.
- من نویسنده این مقاله هستم
استخراج به نرم افزارهای پژوهشی:
چکیده طرح پژوهشی:
بیماری سل که ازدیرباز با س رنوشت بشرگ ره خ ورده است و ع امل آن اول ین ب ار ت وسط راب رت ک خ در س ال 1882شناسایی شد وتست تشخیصی آن بنام تست مانتو با استفاده از PPD معرفی گردید، ولی به دلیل مشارکت آنتی ژنی با مایکوباکتریومهای غیر پاتوژن و BCG استفاده از آن در تشخیص قطعی با مشکل مواجه می باشد امروزه نیز با شیوع ایدز به عنوان دومین بیماری عفونی مرگبار مورد توجه است وهنوز تشخیص قطعی را بدون جدا سازی جرم یا ژنوم نمی توان انجام داد که در موارد فوق بیماری بسیار پیشرفت نموده است. با توجه به مشکلات موجود درزمینه استفاده ازآنتی ژن PPD در تشخیص بیماری سل، دراین تحقیق ازآنتی ژن نوترکیب 6-ESAT (که به عنوان آنتی ژن اختصاصی وایمنی زای مایکوباکتریوم توبوکلوزیس می باشد) استفاده شد ومیزان حساسیت واختصاصیت آن با آنتی ژن PPD درمدل حیوانی خوکچه هندی بررسی گردید. مواد وروشها : جهت بیان آنتی ژن نوترکیب 6-ESAT ، پس از تکثیر ژن فوق از روی ژنوم مایکوباکتریوم توبوکلوزیس، ان را در درون وکتوربیانی PQE30 کلون نموده ودرسیستم M15 بیان گردید. سپس پروتیین فوق با روش الکتروفورز ووسترن بلات تایید شد. جهت انجام تست جلدی ازمدل خوکچه هندی استفاده شد. به این منظور گروه های مختلف حیوان با استفاده از سویه های M.Tuberclusis،M. avium وBCG حساس شدند و پس از دو ماه تست جلدی توسط دو آنتی ژن PPD و 6-ESAT انجام شد. نتایج: پروتیین نوترکیب 6-ESAT درسیستم پروکاریوتی باموفقیت بیان شد ونتایج حاصل از اکتروفورزیس و وسترن بلات موید این امر بود. نتایج حاصل از تست جلدی نشان دادکه 6-rESAT تنها در خوکچه هایی که با مایکوباکتریوم توبوکلوزیس حساس شده بودند واکنش مثبت جلدی ایجاد می کند ودرسایر خوکچه ها واکنش جلدی مثبت دیده نشد. درحالیکه درسویه های غیر توبرکلوزیس نتایج تست جلدی حاصل از PPD هنوز بصورت مثبت دیده می شد. میزان حساسیت 6-rESAT نسبت به PPD درتست Potency به میزان 114 بود که نشان دهنده حساسیت بالای این آنتی ژن درخوکچه هندی بود. بحث ونتیجه گیری: باتوجه به نتایج بدست آمده می توان نتیجه گرفت که استفاده از آنتی ژن نوترکیب 6-ESAT می تواند به عنوان جایگزین بسیار مناسبی به جای PPD درتست جلدی مطرح شود. برای تفاسیراین نتایج استفاده از مدل حیوانی بزرگ وانسان درآینده پیشنهاد می شود . واژه های کلیدی: مایکوباکتریوم توبرکلوزیس-تست جلدی- PPD- ESAT6-کلونینگ- بیان پروتیین نوترکیب