کلونیگ، بیان و تخلیص آنتی ژن نوترکیب ‭6-ESAT ‬مایکوباکتریوم توبرکلوزیس جهت استفاده در تشخیص بیماری سل

بیماری سل که ازدیرباز با س رنوشت بشرگ ره خ ورده است و ع امل آن اول ین ب ار ت وسط راب رت ک خ در س ال ‮‭1882‬شناسایی شد وتست تشخیصی آن بنام تست مانتو با استفاده از ‭PPD ‬معرفی گردید، ولی به دلیل مشارکت آنتی ژنی با مایکوباکتریومهای غیر پاتوژن و ‭BCG ‬استفاده از آن در تشخیص قطعی با مشکل مواجه می باشد امروزه نیز با شیوع ایدز به عنوان دومین بیماری عفونی مرگبار مورد توجه است وهنوز تشخیص قطعی را بدون جدا سازی جرم یا ژنوم نمی توان انجام داد که در موارد فوق بیماری بسیار پیشرفت نموده است. با توجه به مشکلات موجود درزمینه استفاده ازآنتی ژن ‭PPD ‬در تشخیص بیماری سل، دراین تحقیق ازآنتی ژن نوترکیب 6‭-ESAT (‬که به عنوان آنتی ژن اختصاصی وایمنی زای مایکوباکتریوم توبوکلوزیس می باشد) استفاده شد ومیزان حساسیت واختصاصیت آن با آنتی ژن ‭PPD ‬درمدل حیوانی خوکچه هندی بررسی گردید. مواد وروشها : جهت بیان آنتی ژن نوترکیب 6‭-ESAT ‬، پس از تکثیر ژن فوق از روی ژنوم مایکوباکتریوم توبوکلوزیس، ان را در درون وکتوربیانی ‭PQE‬‮‭30‬ کلون نموده ودرسیستم M‮‭15‬ بیان گردید. سپس پروتیین فوق با روش الکتروفورز ووسترن بلات تایید شد. جهت انجام تست جلدی ازمدل خوکچه هندی استفاده شد. به این منظور گروه های مختلف حیوان با استفاده از سویه های ‭M.Tuberclusis‬،‭M. avium ‬و‭BCG ‬حساس شدند و پس از دو ماه تست جلدی توسط دو آنتی ژن ‭PPD ‬و 6‭-ESAT ‬انجام شد. نتایج: پروتیین نوترکیب 6‭-ESAT ‬درسیستم پروکاریوتی باموفقیت بیان شد ونتایج حاصل از اکتروفورزیس و وسترن بلات موید این امر بود. نتایج حاصل از تست جلدی نشان دادکه 6‭-rESAT ‬تنها در خوکچه هایی که با مایکوباکتریوم توبوکلوزیس حساس شده بودند واکنش مثبت جلدی ایجاد می کند ودرسایر خوکچه ها واکنش جلدی مثبت دیده نشد. درحالیکه درسویه های غیر توبرکلوزیس نتایج تست جلدی حاصل از ‭PPD ‬هنوز بصورت مثبت دیده می شد. میزان حساسیت 6‭-rESAT ‬نسبت به ‭PPD ‬درتست ‭Potency ‬به میزان ‮‭114‬ بود که نشان دهنده حساسیت بالای این آنتی ژن درخوکچه هندی بود. بحث ونتیجه گیری: باتوجه به نتایج بدست آمده می توان نتیجه گرفت که استفاده از آنتی ژن نوترکیب 6‭-ESAT ‬می تواند به عنوان جایگزین بسیار مناسبی به جای ‭PPD ‬درتست جلدی مطرح شود. برای تفاسیراین نتایج استفاده از مدل حیوانی بزرگ وانسان درآینده پیشنهاد می شود . واژه های کلیدی: مایکوباکتریوم توبرکلوزیس-تست جلدی‭- PPD- ESAT‬6-کلونینگ- بیان پروتیین نوترکیب