بررسی مقایسه تاثیر آنزیم تریپسین و مایع آلانتوییک تخم مرغ جنین دار در ایجاد پلاک توسط سوشهای لنتوژن ویروس نیوکاسل‭(B1)‬

چکیده امروزه جهت جداسازی و شناسایی سوش های ویروس نیوکاسل از کشت سلولی اولیه یا رده سلولی استفاده می گردد. سوش های واکسینال ویروس جهت رشد در محیط های کشت سلولی نیاز به پروتیازهایی نظیر تریپسین جهت شکستن پروتیین ادغامی و تکثیر ویروس دارند، لذا لازم است این آنزیم در هنگام کشت ویروس به محیط کشت اضافه شود. از آنجایی که سرم موجود در محیط کشت سلول می تواند باعث غیر فعال شدن تریپسین گردد و از طرفی عدم وجود سرم در محیط کشت سلولی موجب رشد نامناسب سلول می شود. لذا استفاده از تریپسین جهت تکثیر ویروس با مشکلاتی همراه است. مایع آلانتوییک تخم مرغ جنین دار به علت داشتن خصوصیاتی شبیه به تریپسین و فعالیت در محیط حاوی سرم شاید بتواند جایگزین مناسبی برای آنزیم تریپسین جهت تکثیر ویروس باشد. هدف از این مطالعه امکان استفاده از مایع آلانتوییک تخم مرغ جنین دار و بررسی رقت های آن جهت جایگزینی با آنزیم تریپسین می باشد. برای انجام این مطالعه، ویروس عامل بیماری نیوکاسل سوش واکسینال B1از موسسه رازی کرج تهیه گردید و پس از تکثیر در تخم مرغ جنین دار ‮‭11-9‬ روزه و تعیین ‭EID‬‮‭50‬ آن، روی سلول ‭MDCK ‬سازگار گردید و در پاساژ 5 ‭CPE(Cytopathic Effect) ‬مشاهده گردید. در پاساژ 6 ، ویروس بدست آمده از پاساژ 5 را پس از مجاور کردن با تریپسین 2 ‭g/ml‬و %5 مایع آلانتوییک، به سلول اضافه شده و نسبت به تعیین تیتر ویروس در در دو گروه با استفاده از آزمونهای هماگلوتیناسیون ‭(HAU/ml) ‬، ‭TCID‬‮‭50‬‭/ml ‬و ‭Plaque assay ‬اقدام شد. میزان ‭HAU/ml ‬در دو گروه تریپسین و مایع آلانتوییک به ترتیب ‮‭2560‬ و ‮‭5220‬ و میزان ‭TCID‬‮‭50‬‭/ml ‬و ‭pfu/ml ‬در دو گروه به ترتیب ‮‭75.104‬ و ‮‭2.3‬ ا ‮‭106‬ بدست آمد. با توجه به نتایج بدست آمده نشان ، مایع آلانتوییک می تواند جایگزینی مناسب برای تریپسین باشد و همچنین از ویروس سازگار شده روی سلول می توان به عنوان سویه واکسینال جهت ایمنی زایی جوجه ها و حذف تخم مرغ ‭SPF ‬در ساخت واکسن استفاده کرد. واژگان کلیدی: سوش واکسینال ‭MDCK‬، ‭EID‬،‮‭50‬ ‭Plaque assay‬، B1، مایع آلانتوییک ، تریپسین