بررسی تهیه و ارزیابی آنتی ژن کشته K99 E.coli از سوشهای موجود در موسسه رازی در مقیاس آزمایشگاهی
صاحب اثر: سازمان تحقیقات، آموزش و ترویج کشاورزی
نوع محتوی: طرح پژوهشی
زبان: فارسی
استان موضوع گزارش: البرز
شهر موضوع گزارش: کرج
شناسه ملی سند علمی: R-1059823
تاریخ درج در سایت: 27 بهمن 1397
دسته بندی علمی: علوم کشاورزی
مشاهده: 281
تعداد صفحات: 44
سال انتشار: 1389
نسخه کامل طرح پژوهشی منتشر نشده است و در دسترس نیست.
- من نویسنده این مقاله هستم
استخراج به نرم افزارهای پژوهشی:
چکیده طرح پژوهشی:
اسهال ناشی از اشریشیاکلیK99 در گوسالهصها بویژه در نخستین روزهای پس از تولد، به علت تلفات و خسارات اقتصادی حاصله از اهمیت زیادی برخوردار است. در این مطالعه از یک طرف میزان شیوع بیماری اشریشیاکلیK99 در استان فارس بررسی شد . و از طرف دیگر پس از جدا سازی سویه های مذبور به همراه سویه های ارسالی از موسسه رازی اقدام به خالص سازی آنتی ژن فیمبری آن گردید. در طی این تحقیق سوآب رکتوم از گوسالهصهای 30-1روزه در مدت یک سال (1387تا 1389) جمعص آوری شد. جهت جداسازی نمونه ها بر روی محیطصهای مک کانکی آگار و ایوزین متیلن بلو و مینکا کشت شد و برای شناسایی سروگروه های اشریشیاکلی K99 به روش اسلاید آگلوتیناسیون مورد استفاده قرار گرفت. با استفاده از روشهای سونیکه کردن، Bead، و حرارت آنتی ژن نمونه های K99 مثبت خالص شد. میزان آنتی ژن بدست آمده در هر مورد با روش لوری تعیین گردید. برای رویت خلوص باندهای پروتیینی از روش SDS-Page استفاده شد. در نهایت با استفاده از ستون گروماتوگرافی آنتی ژن بدست آمده تا حد امکان خالص شد. نتایج نشان داد از 280 اشریشیاکلی جداشده 16 مورد (7/%5) دارای فیبریه K99 بود. همین تعداد با آنتی سرمهای مونووالان O8و O20 در تست آگلوتیناسیون منفی شد. اما با آنتی سرمهای O9 و O101 واکنش مثبت نشان دادند. نتایج خالص سازی با روشهای مختلف حرارت، Beadو سونیکه مشخص ساخت روش حرارت 60 درجه به مدت 20 دقیقه آنتی ژن خالصتری نسبت به بقیه روشها بدست داد. به همین منظور از روش کروماتوگرافی استفاده شد که بسیار مثمر ثمر بود. لذا با ستون Affinity chromatography با استفاده از ژل سفاروز 4 ب فعال شده با سیانوژن بروماید تنها یک باند که مربوط به آنتی ژن K99 بود بدست آمد. میزان آنتی ژن بدست آمده بین 1/5 تا 2/3 میلی گرم در میل لیتر متغیر بدست آمد. باندهای مورد نظردر هر روش با استفاده از SDS-Page قابل مشاهده بود. اگر چه مطالعات زیادی در ارتباط با عفونت و بیماریزایی این باکتری انجام گرفته است، اما بجز بررسی میزان شیوع در یکی دو مورد مطالعه، تاکنون در زمینه بررسی سروگروهصهای O شایع در ایران مطالعه چندانی صورت نگرفته است. در ارتباط با خالص سازی آنتی ژن نیز هیچ موردی در ایران یافت نشد. با توجه به اینکه تهیه این آنتی ژن زمینه برای تولید واکسن را فراهم ساخته است، امید است در آتیه نزدیک این امر محقق گردد. واژگان کلیدی: اشریشیاکلیK99، آنتی ژن، فارس