جداسازی و شناسایی سویه های مایکوپلاسمای عامل بیماری آگالاکسی در استان آذربایجان غربی با روش کشت و ‭PCR‬

سندرم آگالاکسی مسری ، یک بیماری عفونی با علایم متعدد است که نشخوارکنندگان کوچک را درگیر می نماید. عامل بیماری مایکوپلاسما آگالاکتیه است . علایم شاخص این بیماری عبارتند از: آرتریت، کراتوکونژنکتیویت و تورم پستان. با این حال گونه های دیگری از مایکوپلاسما ها که در این بیماری سهیم بوده و دخالت دارند، پنومونی ، سپتی سمی در بره و بزغاله و در برخی موارد سقط جنین را نیز باعث می شوند . سویه های زیر در ایجاد سندرم آگالاکسی مسری نقش عمده ای دارند‭: -Mycoplasma agalactiae - Mycoplasma mycoides subsp. mycoides Large colony type or Mycoplasma mycoides subsp. capri - Mycoplasma capricolum subsp. capricolum - Mycoplasma putrefaciens ‬این پروژه به منظور جدا سازی و شناسایی احتمالی سویه های عامل بیماری به روش کشت و ‭PCR ‬، در استان آذربایجان غربی انجام گرفت. ‮‭1-1‬- مواد و روش ها : در این پروژه به منظور افزایش شانس دستیابی به نمونه های مثبت ، صرفا از دام های بیمار مشکوک به آگالاکسی که علایم بالینی مشابه را نشان می دادند، بسته به اندام درگیر، از مایع اشک ، شیر ، مایع مفصلی ، نمونه گیری به عمل آمد. همچنین برای کسب اطلاع از وجود تنوع سویه ای ، از گله ها و شهرهای مختلف نمونه برداری شد. نمونه های ارسالی از سوی همکاران استانی پس از فیلتراسیون با فیلتر ‮‭0/2‬ میکرون سر سرنگی، در محیط های ‭PPLO Broth ‬و ‭PPLO Agar ‬، کشت داده شده، پس از رشد کلنی ها شیرابه تهیه و عمل جداسازی و تخلیص ‭DNA ‬توسط کیت انجام و در نهایت برای شناسایی و تعیین هویت مایکوپلاسماهای دخیل در بیماری، با استفاده از پرایمرهای استاندارد اختصاصی تهیه شده از آزمایشگاه ‭VLA ‬انگلستان(ویبریج)، آزمایش ‭PCR ‬در مورد هر یک نمونه ها انجام پذیرفت. ‮‭2-1‬- نتایج : در این پروژه از ‮‭119‬ نمونه اخذ شده ، ‮‭25‬ نمونه در محیط کشت مایکوپلاسما رشد کردند که کلنی های حاصل در مشاهده ماکروسکوپی و میکروسکوپی دارای مشخصات مایکوپلاسما بودند. به منظور شناسایی و تعیین هویت مایکوپلاسماهای عامل بیماری، پس از استخراج و تخلیص ‭DNA ‬، آزمایش ‭PCR ‬انجام گرفت که در نتیجه از تعداد ‮‭25‬ مورد جنس مایکوپلاسما همگی مایکوپلاسما آگالاکتیه تشخیص داده شد . ‮‭3-1‬- بحث : علل ترجیح استفاده از تکنیک کشت و ‭PCR ‬نسبت به روش های مرسوم تشخیص مایکوپلاسماهای پاتوژن عبارتند از: الف) هر چند روش کشت روشی کند( حداقل ‮‭5-10‬ روز) و غیر اختصاصی برای تشخیص مایکوپلاسماها است ولی به دلیل نیاز به دستیابی به نمونه های زنده و امکان تکثیر و تخلیص نمونه های مخلوط ، از این روش استفاده گردید. ب) روش ‭PCR ‬به دلیل حساسیت و ویژگی بالا و امکان تفکیک دقیق سویه ها از هم قابل اعتماد و استناد می باشد. ج) در مطالعات اپیدمیولوژیک در سطح گله ، هر چند روش ‭ELISA ‬روشی مقرون به صرفه و روش تشخیصی جایگزین نسبتا سریعی است اما صحت ‭Specifity ‬و دقت ‭Sensitivity ‬نتایج آن در مقایسه با ‭PCR ‬کمتر است. از طرفی الایزاهای شناساگر آنتی بادی، تنها پس از افزایش تیتر آنتی بادی بعد از 2 هفته از ابتلای به بیماری، قادر به تشخیص بوده و حتی از شناسایی دام های مبتلا به فرم مزمن بیماری نیز عاجزند. این که تمامی جدایه ها مایکوپلاسما آگالاکتیه تشخیص داده شدند موید آن است که این گونه در میان دام های مبتلا در آذربایجان غربی حداقل در مدت مورد مطالعه گونه غالب بوده است. با این حال به دلیل جداسازی و شناسایی گونه های دیگر مایکوپلاسماهای عامل بیماری آگالاکسی در پروژه های دیگر، به نظر می رسد که در صورت گسترش دامنه مطالعه و اخذ نمونه های بیشتر بتوان این گونه ها را نیز جدا و شناسایی نمود. پیشنهاد: تقویت روش های تشخیص و کسب اطلاعات درست از جمله استفاده از آنتی بادی های پلی کلونال و به خصوص مونوکلونال برای تشخیص تفریقی اولیه برای مطالعات اپیدمیولوژیک و در نهایت انجام آزمایش ‭PCR ‬راه گشا می باشد. تغییر در خط تولید و استفاده از سویه های دیگر مایکوپلاسمای عامل بیماری آگالاکسی می تواند در پیشگیری و کاهش بروز بیماری مفید واقع شود. واژه های کلیدی: مایکوپلاسما آگالاکتیه- آگالاکسی مسری‭- PCR- ‬آذربایجان غربی