تشخیص ویروس تب برفکی به روش ‭Real-time PCR ‬و مقایسه آن با روش ‭RT-PCR ‬و الایزا

روش ‭Real time RT-PCR ‬از جمله روشهای دقیق، سریع وحساس می باشد که جهت تشخیص ویروسها از جمله ویروس بیماری تب برفکی از آن استفاده می شود. در این بررسی تعداد ‮‭70‬ نمونه از اپی تلیومهای زبان مشکوک به بیماری تب برفکی انتخاب و با دو روش آزمایش‭RT-PCR ‬یک مرحله ای و‭Real time RT-PCR ‬و ‭ELISA‬مورد ارزیابی قرار گرفت. جهت آزمایش ‭Real time RT-PCR ‬از یک جفت پرایمر و پروب ‭Cal ‬و جهت آزمایش ‭RT-PCR ‬از پرایمرهای P،‮‭32‬P‮‭33‬ استفاده شد. همگی پرایمرها و پروبهای استفاده شده ‭universal ‬بوده و وجود ویروس تب برفکی در نمونه را بدون در نظر گرفتن تیپ و تحت تیپ تشخیص می دهد،بطوریکه با استفاده از این پرایمرها و پروبها ویروسهای C،‭Asia‬،O،A،‭SAT‬،1‭SAT‬،2‭SAT‬3 شناسایی شد. با توجه به مقایسه بین این دو روش تشخیصی ‮‭5.98‬ درصد با یکدیگر نتایج مشابه داشتند‭. Gold test ‬در این بررسی ‭ELISA ‬در نظر گرفته شده است. منحنی استاندارد رسم شده در آزمایش ‭Real time ‬یکبار بر اساس تهیه رقت از ‭RNA ‬ی استخراج شده از ویروس و یکبار ‭RNA ‬ی استخراج شده از رقت های مختلف ویروس تهیه شد، که میزان ‭CT Value ‬محاسبه شده در هر روش تهیه رقت با یکدیگر مشابه و تفاوتی با هم ندارند. و با در نظر گرفتن نمونه های مثبت ومنفی و تعیین میزان ‭CT Value ‬بالاتر از ‮‭38‬ بعنوان منفی و زیر ‮‭38‬ به عنوان نمونه مثبت و حاوی ویروس تب برفکی در نظر گرفته شده که با نتایج حاصل از ‭RT-PCR ‬و نیز نتایج دیگر محققین هم خوانی دارد.