مقایسه و بررسی امکان سمیت سلولی و مولکولی عصاره جلبک ‭Cochlodinum polykrikoides ‬در سلول های کبدی موش و ماهی

در این تحقیق، ما مکانیسم های سیتوتوکسیک عصاره آبی ‭Cochlodinium polykricoides ‬که مسیول شکوفایی جلبکی شدید و گسترده در خلیج فارس و دریای عمان طی سال های ‮‭2008-2009‬ بود، را در سلولهای کبدی کبد جدا شده موش صحرایی و ماهی قزل آلا مورد بررسی و مقایسه قرار دادیم. علاوه بر این، نقش استرس اکسیداتیو و میتوکندری در القای آپوپتوزیس (مرگ برنامه ریزی شده سلولی) نیز مورد بررسی قرار گرفت. سلولهای کبدی ایزوله با پرفیوژن کبد توسط کلاژناز به دست آمد. برای تعیین میزان ‭"ROS" ‬تولیدی کبدی، دی کلروفلورسین دی استات به عنوان معرف استفاده شد. جذب رنگ فلورسنت کاتیونی، رودامین ،‮‭123‬ برای تعیین پتانسیل غشای میتوکندری سلولهای کبدی استفاده شد. جذب رنگ فلورسنت آکریدین اورانژ برای تعیین آسیب غشای لیزوزومی سلولهای کبدی استفاده شد‭. GSH ‬و ‭GSSG ‬با روشی اسپکتروفتومتریک تعیین شد. فعالیت کاسپاز3 و فنوتیپ آپوپتوز به ترتیب با استفاده از کیت سنجش فعالیت کاسپاز 3 محصول شرکت سیگما و کیت تشخیص آپوپتوز محصول شرکت سیگما آلدریچ بررسی شد. انکوباسیون عصاره جلبک با سلولهای ایزوله کبد رت، باعث لیز غشا سلولها، تشکیل گونه های فعال اکسیژن ‭(ROS)‬، کاهش ذخایر گلوتاتیون، سقوط پتانسیل غشای میتوکندری، تخلیه ‭ATP ‬و افزایش در نسبت ‭ATP / ADP‬، آزادی سیتوکروم ‭C ‬به سیتوزول، فعال شدن آبشار کاسپازی و ظهور فنوتیپ آپوپتوز گردید. آنتی اکسیدان ها ( -توکوفرول سوکسینات و ‭BHT)‬، جذب کننده های رادیکال هیدروکسیل (مانیتول و ‭DMSO)‬، مسدود کننده های روزنه ی نفوذپذیری میتوکندری ‭(MPT) (‬سیکلوسپورین، کارنیتین و تری فلوپرازین)، مهارکننده های ‭NADPH P‬‮‭450‬ ردوکتاز ( دی فنیل یدونیوم کلرید)، مهار کننده های ‭CYP‬2E1 (فنیل ایمیدازول و 4-متیل پیرازول) و تولید کنندگان ‭ATP (L-‬گلوتامین، فروکتوز و زایلیتول) باعث مهار فعال شدن 3‭-caspase ‬و مرگ سلولی گردیدند. داده های ما نشان داد که عصاره جلبک سیگنالینگ آپوپتوز را از طریق استرس اکسیداتیو و مسیر میتوکندریایی فعال می کند. تشکیل ‭ROS ‬به طور مستقیم می تواند در باز شدن منافذ ‭MPT ‬میتوکندریایی و فعال شدن آبشار کاسپازی نقش داشته باشد که منجر به اثرات سمی ‭C.polykricoides ‬بر سلولهای کبدی ایزوله موش صحرایی و ماهی قزل آلا می گردد. این یافته ها منجر به درک بهتری از اثرات سمی ‭C.polykricoides ‬بر روی سلولهای کبد پستانداران و آبزیان می گردد. نتایج ما حساسیت بالاتر گونه ی آبزی به اثرات سمی ‭C.polykricoides (‬بیش از دویست برابر) نسبت به گونه ی پستاندار مورد آزمایش نشان داد. از طرف دیگر در سلول های هپاتوسیت ماهی اثرات سمی عصاره جلبک بر غشای لیزوزومی مشاهده گردید که در هپاتوسیت های ماهی مشاهده نگردید. کلمات کلیدی:کوکلودینیوم،سمیت سلولی، قزل آلا و موش، خلیج فارس ، ایران