تعیین تنوع گونه ای آناپلاسما در گاوهای اطراف اصفهان

آناپلاسموز بیماری گاو و دیگر نشخوارکنندگان است که توسط ریکتزیاهای داخل سلولی از جنس آناپلاسما ایجاد و از طریق بند پایان منتقل می شود. بیماری ضررهای اقتصادی قابل توجهی را به صنعت گاوداری دنیا وارد می کند. جنس آناپلاسما شامل آناپلاسما مارجیناله، آناپلاسما سنتراله، آناپلاسما بوویس و آناپلاسما فاگوسیتوفیلم می باشد که آناپلاسما مارجیناله بیشترین شیوع را در دنیا دارد.آزمایش میکروسکوپی گسترشهای خونی رنگ آمیزی شده با گیمسا عمده ترین روش تشخیص آناپلاسموز حاد می باشد اما بعلت میزان پایین پارازیتمی در گاوهای حامل، این روش برای تشخیص گاوهایی که عفونت پایدار دارند توصیه نمی شود. واکنش زنجیره ای پلی مراز روش استاندارد طلایی جهت تشخیص تفریقی آناپلاسموز می باشد . در این مطالعه ‮‭150‬ نمونه خون و اسمیر خونی از گاوهای بدون علایم بیماری گاوداریهای اطراف اصفهان که سابقه بیماریهای منتقله از کنه را داشته اند تهیه شد. در ابتدا لامهای رنگ آمیزی شده با گیمسا بررسی و ‭DNA ‬استخراجی از نمونه های خونی با جفت آغازگری که قطعه ‮‭781‬ جفت بازی از ژن ‮‭16‬‭S rRNA ‬جنس آناپلاسما را تکثیر می کرد، تکثیر شد. در ‮‭75‬ گسترش خونی تعداد کمی اجرام شبیه به آناپلاسما در گلبولهای قرمز دیده شد. درصد گلبولهای قرمزی که این اجرام را در خود جای داده بودند بین ‮‭10-2-10-3‬ درصد بود. ‮‭58‬ نمونه از ‮‭150‬ نمونه خون در اولین ‭ PCR ‬از نظر جنس آناپلاسما مثبت شدند. تمامی نمونه های مثبت با ‭nested-PCR ‬اختصاصی از نظر وجود آناپلاسما سنتراله سویه آموری، آناپلاسما بوویس و آناپلاسما فاگوسیتوفیلم بررسی شدند و ‮‭66 1/33‬،/2 و ‮‭1/33‬ در صد از نمونه ها به ترتیب از نظر آناپلاسما سنتراله سویه آموری ،آناپلاسما بوویس و آناپلاسما فاگوسیتوفیلم مثبت تشخیص داده شدند. به دلیل تشابه زیاد توالی نوکلیوتیدهای قسمت بسیار متغیر V1 ژن‮‭16‬‭S rRNA ‬در سه گونه آناپلاسما مارجیناله، آناپلاسما سنتراله سویه آفریقای جنوبی و آناپلاسما اوویس طراحی آغازگرهای اختصاصی غیر ممکن بود. بنابراین آغازگری برای تکثیر سه گونه مذکور طراحی شد. محصول ‭Semi-nested PCR ‬بوسیله آنزیم اندونوکلیاز ‭Bst‬‮‭1107‬ ‭I ‬و‭(FunD II)MvnI ‬آنالیز شد. آنزیم اندونوکلیاز ‭Bst‬‮‭1107‬ ‭I ‬تنها می تواند محصول ‭Semi-nested PCR ‬منتج از ژنوم آناپلاسما مارجیناله را برش دهد و نمی تواند محصول ‭PCR ‬متعلق به آناپلاسما سنتراله سویه آفریقای جنوبی و آناپلاسما اوویس را برش دهد درحالی که آنزیم اندونوکلیاز‭(FunD II) MvnI ‬محصول‭PCR ‬متعلق به آناپلاسما سنتراله سویه آفریقای جنوبی و آناپلاسما اوویس را برش می دهد و نمی تواند محصول ‭PCR ‬متعلق به آناپلاسما مارجیناله را برش دهد. نتایج ‭PCR-RFLP ‬نشان می دهد که ‮‭76‬/%‮‭38‬ نمونه های خون از نظر آناپلاسما مارجیناله مثبت می باشند. آناپلاسما سنتراله سویه آفریقای جنوبی و آناپلاسما اوویس در نمونه ها یافت نشد. این مطالعه اولین تشخیص ملکولی گونه های آناپلاسما سنتراله سویه آموری، آناپلاسما بوویس و آناپلاسما فاگوسیتوفیلم در ایران است. نتایج نشان می دهد که روش ‭PCR-RFLP ‬بر اساس آغازگرهای انتخابی و آنزیمهای اندونوکلیاز روشی ابداعی برای تفریق گونه های آناپلاسما بر اساس ژن ‮‭16‬‭S rRNA ‬می باشد و می تواند در مطالعات اپیدمیولوژی جهت تشخیص گونه های آناپلاسما در گاوهایی که عفونت پایدار دارند، توصیه شود. علاوه بر این، نتایج این مطالعه نشان می دهد که آزمایش میکروسکوپی اسمیر های خونی به دلیل تعداد کم گلبولهای قرمز آلوده و مشکل بودن تفریق این اجسام، روش مناسبی برای تشخیص دامهای حامل نیست. واژه های کلیدی: ایران، اصفهان، گونه های آناپلاسما، گاو، آناپلاسما مارجیناله، آناپلاسما سنتراله، آناپلاسما بوویس، آناپلاسما فاگوسیتوفیلم، ‭PCR-RFLP‬، ‮‭16‬‭S rRNA