جداسازی و شناسایی مولکولی ویروس عامل بیماری ‭BVD ‬از گاوهای شیری گاوداری های صنعتی استان خراسان رضوی

استان خراسان رضوی یکی از قطب های دامپروری کشور محسوب می گردد. نظر به مرز طولانی این استان با دو کشور افغانستان وترکمنستان و خسارت های اقتصادی زیاد، تشخیص، کنترل و پیشگیری بیماری های عفونی در این استان بسیار با اهمیت است. بیماری اسهال ویروسی گاوها ‭BVD)) ‬به وسیله جنس پستی ویروس از خانواده فلاوی ویریده ایجاد می گردد. این ویروس قادر است گاو، گوسفند و بز را آلوده کند و بسته به زمان آلودگی موجب بروز علایم مختلف گردد. چنانچه این آلودگی در زمان کمتر از 4ماه اول آبستنی به وسیله بیوتیپ ‭Ncp ‬اتفاق افتد گوساله هایی که بعد ها بدنیا خواهند آمد نسبت به ویروس تحمل ایمنی پیدا کرده و علاوه بر اینکه ویروس را به میزان زیاد دفع می نماید در نهایت به عنوان دامی با عفونت پایدار‭(PI) ‬می باشد که سبب حضور دایم ویروس در گله خواهد بود. هدف از این مطالعه به دست آوردن میزان شیوع آلودگی گاوهای صنعتی استان خراسان رضوی به ویروس ‭BVD ‬به روشهای الایزا و ‭RT-PCR ‬می باشد. در این مطالعه تعداد ‮‭196‬ نمونه خون از گاو های صنعتی استان (از 6دامداری صنعتی) جمع آوری شد. پس از جدا سازی سرم، آزمایش شناسایی آنتی ژن با استفاده از کیت الیزای‭) Ag Mono Indirect(ASBVD‬6‭) (SERELISABVD P‬‮‭80‬ و نیز آزمایش شناسایی مولکولی ویروس با استفاده از ‭RT-PCR ‬انجام گرفت. استخراج ‭RNA ‬بوسیله کیت ‭High Pure Viral Nucleic Acid Kit ‬شرکت ‭Roch ‬طبق دستورالعمل، انجام شد. ساخت ‭cDNA ‬توسط کیت ‭Accupower RocketScript RT PreMix‬صورت گرفت و در نهایت قطعه مورد نظر بوسیله پرایمرهای ‭UTRR ‬و ‭UTRF‬به روش ‭RT-PCR ‬تکثیر یافت و پس از الکتروفورز با استفاده از ژل یک درصد، نمونه مثبت با باند ‮‭296‬‭bp ‬مشاهده گردید. نتایج نشان داد که با استفاده از هر دو روش الایزا و ‭RT-PCR ‬تنها یک نمونه مثبت می باشد (‮‭0/8‬درصد). همچنین با استفاده از پرایمر های اختصاصی تعیین تیپ و نیز پس از تعیین توالی قطعه مورد نظر در ناحیه ‭UTR‬5 ژنوم ویروس، مشخص گردید که ویروس ، از نوع تیپ ‭I - BVDV ‬می باشد. نتایج حاصل از رسم نمودار فیلوژنتیک ( رسم دندروگرام) ویروس ‭BVDV ‬نشان داد که ویروس تعیین توالی شده از استان خراسان رضوی با ویروس های ایران ، ترکیه و ژاپن در یک خط سرنوشتی قرار دارند همچنین با استفاده از کشت بر روی سلول ‭MDBK ‬نشان داده شد که ‭BVDV ‬از نوع غیر ساپتوپاتیک ‭non-cytopathic ‬بوده و تا پنج پاساژ نیز علایم سایتوپاتیک از خود نشان نداد. ویروس جدا سازی شده با استفاده از ‭RT-PCR ‬مورد شناسایی مجدد قرار گرفت. کلمات کلیدی: اسهال ویروسی گاوان، شناسایی مولکولی، الیزا ، کشت سلولی