راه اندازی روش LAL در سنجش LPS سوسپانسیون سیاه سرفه و بررسی میزان ارتباط نتایج حاصل با آزمون استانداردMouse Weight Gain(MWG) برای ارزیابی عدم سمیت واکسن سیاه سرفه
صاحب اثر: سازمان تحقیقات، آموزش و ترویج کشاورزی
نوع محتوی: طرح پژوهشی
زبان: فارسی
استان موضوع گزارش: البرز
شهر موضوع گزارش: کرج
شناسه ملی سند علمی: R-1055952
تاریخ درج در سایت: 27 بهمن 1397
دسته بندی علمی: علوم کشاورزی
مشاهده: 600
تعداد صفحات: 61
سال انتشار: 1393
نسخه کامل طرح پژوهشی منتشر نشده است و در دسترس نیست.
- من نویسنده این مقاله هستم
استخراج به نرم افزارهای پژوهشی:
چکیده طرح پژوهشی:
بیماری سیاه سرفه یک عفونت حاد بسیار واگیر دستگاه تنفسی است که غالبا توسط باکتری بوردتلا پرتوسیس ایجاد میشود و گاه بردتلا پاراپرتوسیس نیز می تواند سندرم بالینی مشابه ایجاد کند. این باکتری در دستگاه تنفس فوقانی انسان سکونت می یابد و بیماری توسط تماس با ترشحات تنفسی افراد بیمار از طریق هوا انتقال می یابد.قبل از برنامه های واکسیناسیون گسترده،سیاه سرفه شایعترین علت مرگ و میر ناشی از بیماریهای قابل پیشگیری در کودکان زیر 14 سال بوده است.پوشش بالای ایمن سازی با یک واکسن موثر عامل مهم در پیشگیری از این بیماری است. در ایران نیز ایمن سازی فعال اساس پیشگیری از بیماری سیاه سرفه را تشکیل می دهد که واکسن آن حاوی باکتری کشته شده بوردتلا پرتوسیس است که بصورت واکسن ثلاث همراه با دیفتری و کزاز وجود دارد و در 5 مرحله (3 دوز ایمن سازی و 2 دوز یادآور) به اطفال تزریق می شود. واکسن سیاه سرفه باید در مرحله بالک و فاینال بالک از نظرsaftey تست شود و بی ضرری آن مورد بررسی قرار گیرد که به این منظور تست mouse weight gain (MWG) انجام می شود. تست MWG یک تست کیفی و general بوده که برای بررسی وجود یا عدم وجود سمیت می باشد. این تست دارای معایبی است ازجمله: عدم تکرارپذیری بالای تست، مصرف زیاد حیوان آزمایشگاهی بعلت ماهیت این تست و تکرارهای متوالی آن، طولانی بودن نسبی آزمایش و تاخیر در ارسال جواب درصورت تکرار و آزمایش مجدد. از طرفی با توجه با اینکه بوردتلا پرتوسیس یک ارگانیسم گرم منفی است بنابراین واکسن سیاه سرفه حاوی پیکره شامل (LPS)lipopolysaccharide یا endotoxin می باشد و باید محتوای اندوتوکسین آن ارزیابی شود زیرا بخشی از عوارض جانبی واکسن حاوی پیکره مربوط به اندوتوکسین آن می باشد، لذا استفاده از تست LAL (Limulus Amebocyte Lysate) که از تستهای آزمایشگاهی توصیه شده جهت ارزیابی سمیت و بی ضرری واکسن سیاه سرفه است جهت بررسی میزان اندوتوکسین واکسن سیاه سرفه ضروری به نظر می رسد و انجام این تست پیش از انجام تست mouse weight gain (MWG) باعث کاهش مصرف حیوان آزمایشگاهی و افزایش سرعت تشخیص سمیت می شود. از طرفی توسط مراجع بین المللی مانند سازمان بهداشت جهانی(WHO) برای اندوتوکسین موجود در واکسن سیاه سرفه حاوی پیکره هیچ مقدار قابل قبول بین المللی تعیین نشده(cut off) و این وظیفه به عهده موسسات واکسن سازی گذاشته شده است، که آن ها باید میزان اندوتوکسین لات های تولیدی واکسن سیاه سرفه غیر توکسیک خود را اندازه گیری کنند و با توجه به علایم کلینیکی و بالینی،cut off اندوتوکسین فرآورده های تولیدی خود را تعیین کنند. هدف از این مطالعه تعیین cut off برای اندوتوکسین واکسن سیاه سرفه و نیز بکارگیری تست LAL بعنوان مدل پیش غربالگری یا prescreening model و همچنین بررسی میزان ارتباط نتایج حاصل از این تست با نتایج تستMWG در ارزیابی سمیت بود. برای این منظور روی 44 شماره واکسن سیاه سرفه(دتوکسیفیه شده با فرمالین و هیامین) تستMWG و LAL بصورت همزمان انجام شده و میزان LPS هر سوسپانسیون سنجیده شد. cut off اندوتوکسین برای واکسن سیاه سرفه حاوی پیکره تولیدی موسسه رازی برای واکسن 758472 40 OU/ml، EU/ml و برای واکسن 11559 32 OU/ml، EU/mlمحاسبه گردید. با توجه به تعیین cut off برای LPS واکسن سیاه سرفه تولیدی موسسه رازی، از این پس روی واکسن های سیاه سرفه تولید شده ابتدا تست LAL انجام میشود و درصورتی که میزان LPS سوسپانسیون کمتر از cut off باشد تست MWG روی سوسپانسیون انجام می شود و درصورت پاس شدن تستMWG ، واکسن پاس می شود که به این صورت در خلال انجام تست های کنترلی روی واکسن از انجام تست های MWG اضافی جلوگیری شده و درنتیجه تعداد حیوان آزمایشگاهی کمتری مصرف می شود و نیز از ورود واکسن های سیاه سرفه با اندوتوکسین بالا به چرخه واکسیناسیون اطفال جلوگیری شده که در نتیجه باعث حذف بخشی از عوارض جانبی ناشی از تزریق واکسن مانند تب بالا، گریه بیش از سه ساعت و تشنج که به اندوتوکسین بالا مربوط می باشد خواهد شد. از طرفی با توجه به اینکه در متد قبلی تولید واکسن سیاه سرفه در موسسه رازی از هیچ دتوکسیفیه کننده ای استفاده نمیشد ولی در متد فعلی تولید ،از دتوکسیفیه کننده جهت سمیت زدایی سوسپانسیون سیاه سرفه استفاده می شود،اطلاع دقیقی از زمان دتوکسیفیکاسیون کامل در دست نبود و هدف بررسی این نکته بود که سوسپانسیون سیاه سرفه طی چه مدت زمانی بطور کامل دتوکسیفیه شده و از نظر safety قابل تایید و قابل استفاده در فرمولاسیون واکسن DTP است.نتیجه این بود که دتوکسیفیکاسیون سوسپانسیون سیاه سرفه تولیدی در موسسه رازی بر خلاف آنچه در منابع حدود 1/5-2 ماه برای دتوکسیفیه کننده فرمالین ذکر شده بود در طی مدت زمان 5/5-6 ماه بطور کامل انجام می شود که حدودا 2-3 برابر زمان مورد انتظار است و قبل از این زمان، ترکیب شدن سوسپانسیون سیاه سرفه با توکسوییدهای دیفتری و کزاز نباید صورت پذیرد. از طرفی محتوای اندوتوکسین واکسن سیاه سرفه )32 OU/mlمتد قبلی تولید) در مقایسه با واکسن 40 OU/ml (متد جدید تولید)، حدود 65 برابر کمتر و بسیار نزدیک به محتوای اندوتوکسین واکسنهای مطالعه شده در کشورهای دیگر است.بنابراین از آنجایی که اندوتوکسین کمتر به معنی عوارض جانبی کمتر است ،ساخت واکسن سیاه سرفه ای که دارای پوتنسی قابل قبول اما با تعداد جرم کمتر است از اهمیت بسزایی برخوردارمی باشد،زیرا بالا بردن جرم باکتری در دز واکسن ،باعث بیشتر شدن توانمندی واکسن و در عوض به سبب افزایش قابل توجه اندوتوکسین باعث افزایش عوارض جانبی خواهد شد.