توسعه تکنیک ‭Multiplex PCR ‬جهت ردیابی هم زمان عوامل بیماری های جاروک و میوه سبز مرکبات

جاروک و میوه سبز از بیماری های مهم و خطرناک مرکبات در نواحی جنوبی ایران محسوب می شوند که از اهمیت قرنطینه ایی ملی و بین المللی برخوردارند. عوامل این بیماریها پارازیت اجباری بوده و در محیط کشت های مصنوعی قابل کشت نیستند. در حال حاضر، ‭PCR ‬حساسترین و دقیق ترین روش جهت ردیابی و تشخیص عوامل همراه با این بیماریها بشمار میرود. انجام ‭PCR ‬و ردیابی عوامل بیماریهای جاروک و میوه سبز در واکنش های جداگانه (بویژه در فرایند گواهی سلامت نهال، ردیابی سالانه این بیماریها و در پست های قرنطینه مرزی که الزاما تعداد زیادی نمونه مورد بررسی قرار می گیرد) بسیار زمان بر بوده و به هزینه زیادی نیاز دارد. در این تحقیق ترکیب اجزا ‭PCR master mix ‬و پروفیل دمایی مناسب به منظور انجام واکنش ‭multiplex PCR ‬با استفاده آغازگر های ‭fp‬‮‭400‬‭/rp‬‮‭400‬ و P4‭/P‬7 به منظور ردیابی همزمان عوامل بیماریهای جاروک و میوه سبز مرکبات در یک واکنش ابداع و معرفی شده است. در هر واکنش ‭multiplex PCR ‬در نمونه آلوده به بیماریهای جاروک و میوه سبز، دو باند با اندازه های ‮‭400‬ و ‮‭500‬ جفت بطور همزمان تکثیر گردید درحالیکه در نمونه سالم هیچ باندی تشکیل نشد. نتایج حاصل از واکنش ‭multiplex PCR ‬با آزمون های ‭single PCR ‬با هدف ردیابی هریک از عوامل بیماریزا بصورت جداگانه مقایسه و با تعیین توالی نوکلیوتیدی نواحی تکثیر شده مورد تایید قرار گرفت.