استفاده از پروتیین نوترکیب جهت تولید آنتی بادی اختصاصی بر علیه ویروس تریستزای مرکبات

بیماری تریستزای مرکبات یکی از مخربصترین بیماری های مرکبات در مناطق شمالی و جنوبی کشور به شمار می رود که توسط ویروس تریستزای مرکبات ‭(Citrus tristeza virus-CTV) ‬ایجاد می شود. امروزه استفاده از کیت های تشخیصی به منظور ردیابی این بیماری در باغات جهت جلوگیری از گسترش بیماری و تولید نهال های عاری از ویروس اهمیت به سزایی دارد. هزینه بالا جهت تهیه کیت های تشخیصی از جمله عوامل محدود کننده در استفاده از آنها می باشد. در مطالعه حاضر تولید آنتی بادی های اختصاصی برعلیه ویروس ‭CTV ‬با استفاده از فناوری پروتیین نوترکیب صورت گرفت. برای این منظور ژن کد کننده پروتیین پوششی ‭CTV ‬در میزبان باکتریایی به صورت متصل با ترادف های اختصاصی ناقل بیان گردیده و پروتیین پوششی به صورت نوترکیب (بوزن ‮‭29‬ کیلودالتون) دراین میزبان تولید گردید. خالص سازی پروتیین در شرایط طبیعی و با روش کروماتوگرافی تمایلی انجام شد. شرایط بیان و خالص سازی پروتیین نوترکیب با روش های الکتروفورز پروتیین و آزمون لکه گذاری بهینه سازی و تایید گردید. پروتیین نوترکیب خالص برای ایمنی زایی خرگوش و تولید آنتی بادی چند همسانه ای اختصاصی استفاده شد. خالص سازی ایمونوگلوبولین از سرم انجام گرفت و سپس جهت نشاندار نمودن آن از دو آنزیم آلکالین فسفاتاز و پراکسیداز استفاده گردید. نتایج آزمایش های سرولوژیکی ایمونوبلات و ‭DAS-ELISA ‬موید کارکرد موثر و دقیق آنتی بادی پلی کلونال تولید شده برای شناسایی ویروس عامل بیماری تریستزا بود به نحوی که آنتی بادی تولید شده توانست تمامی نمونه های مثبت تشخیص داده شده با کیت تجاری را مورد شناسایی قرار دهد. لغات کلیدی: آنتی بادی چند همسانه ای، بیماری تریستزای مرکبات، پروتیین نوترکیب، کیت تشخیصی