طراحی و تولید آزمایشگاهی پپتید آنتی ژنی چند اپیتوپی تحریک کننده سلول های ‭T ‬بر علیه اکینوکوک و ارزیابی پاسخ ایمنی در مدل حیوانی

در این پروژه نخست اپیتوپهای خطی سلول های ‭Th‬1 پنج آننتی ژن مهم اکینوکوکوس گرانولوزوس با نرم افزار های ‭Propred ‬و ‭IEDB‬با بهترین قدرت اتصال به مولکول های ‭MHC ‬پیش بینی شدند. پس از سنتز ‭DNA‬، مینی ژن ساخته شده داخل وکتور بیانی ‭pET‬‮‭41‬‭a+ ‬کلون شد به منظور فهم بهتر اثر تجمعی اپیتوپها قطعه دربرگیرنده اپیتوپ های آنتی ژن ‭EgA‬‮‭31‬ با ‭PCR ‬تکثیر وجداگانه در دو وکتور‭pGEX‬4T1 و‭pEGFP-N‬1 کلون شد. پروتیینهای کایمریک در سلول‭E. coli ‬فیوژن با ‭GST ‬بیان شدند. بیان ‭GFP-ChEgA‬‮‭31‬ در سلول های ‭CHO ‬با فلورسنت میکروسکوپی و ‭RT-PCR ‬تایید شد. بیان پروتیینهای کایمریک با وسترن بلاتینگ تایید شد، سپس با روش افینیتی خالص سازی و به موش های 6‭/C‬‮‭57‬‭BL ‬همراه با اجوانت فروند ایمن شدند. نتایج الایزا نشان داد که‭IFN- ‬در سلول های طحال موشهای ایمن شده با آنتی ژن ‭GST-ChEgMEA ‬و ‭GFP-ChEgA‬‮‭31‬حدودا ‮‭1300‬ پیکوگرم و در گروه ‭GST-ChEgA‬‮‭31‬ حدودا ‮‭1300-634‬ پیکوگرم در میلی لیتر بیان شد، که نشان داد پروتیین کایمریک چند اپیتوپی بخوبی سیستم ایمنی سلولی را تحریک کرده است. از طرفی افزایش معنی داری در میزان ‭IL‬،4 ‭IL‬‮‭10‬مشاهده نشد. موشهای ایمن شده، با تعداد پانصد پروتواسکولکس زنده چالنج و بعد از سه ماه کیست ها شمارش شدند. مشاهدات نشان داد که آنتی ژن %‮‭50‬ ‭GST-ChEgA‬‮‭31‬ و در گروه تزریق شده با ‭pEGFP-ChEgA‬‮‭31‬ حدودا ‮‭60‬ % مصونیت ایجاد نمودند، در حالیکه آنتی ژن کایمریک ‭GST-ChMEA‬مصونیت ‮‭99/6‬-%‮‭100‬ علیه پروتواسکولکس ایجاد نمود. نتایج گواه این مطلب است که پیش بینی اپیتوپ ها بر اساس متد بیوانفورماتیک جهت طراحی آنتی ژن بر علیه اکینوکوکوس گرانولوزوس مفید بوده است