جداسازی و تعیین شیوع سرووارهای مختلف لپتوسپیرا در استانهای اردبیل – گیلان – مازندران- گلستان

لپتوسپیروزیس یک بیماری زیونوزیس (Zoonosis) می باشد که توسط باکتری لپتوسپیرا Leptospira ایجاد می گردد. لپتوسپیراها باکتری هایی هستند که طیف وسیعی از حیوانات اهلی و وحشی وهمچنین انسان را آلوده می کند. از میان حیوانات حساس به این باکتری می توان از گاو ، تک سمی ها، گوسفند، بز، خوک، سگ وجوندگان نام برد.این بیماری دارای انتشار جهانی بوده ولی بیشترین شیوع آن در مناطق معتدل و گرمسیری و بخصوص نواحی که میزان بارندگی در آنها بالا می باشدو نواحی دارای خاک با pH خنثی و یا کمی قلیایی مانند شمال ایران، دیده شده است. انتقال آن از طریق تماس افراد با آب یا خاک آلوده به ادرار پستانداران صورت می گیرد. لپتوسپیروزیس یک بیماری وابسته به شغل بوده و بیشتر در کشاورزان ودامداران مشاهده می شود. متاسفانه به دلایل مختلف این بیماری به درستی تشخیص داده نمی شود . به همین دلیل تشخیص سریع و دقیق بیماری و نیز تفکیک گونه های بیماریزا از غیربیماریزا از مهمترین اقداماتی است که باید جهت پیشگیری، کنترل و درمان صحیح بیماری صورت گیرد. روشهای مختلفی از جمله آزمایشات باکتریولوژیک مانند کشت و آزمایشات سرولوژیک مانند MAT جهت تشخیص لپتوسپیروزاستفاده می شوند، ولی هریک دارای نقاط ضعفی می باشند مانند رشد سخت و کند باکتری در کشت؛ نیاز به زمان مناسب برای نمونه گیری ، نیروی ماهر ، لزوم کار با باکتری زنده در MAT موجب گردیده تا روش های مولکولی به دلیل حساسیت و دقت بالای آنها کاندید مناسبی برای تشخیص عامل ایجاد کننده این بیماری عفونی محسوب گردند. البته وجود یک تست سرولوژیک مناسب با ویژگی و حساسیت بالا برای تشخیص درست و به موقع این بیماری ضروری به نظر می رسد.مطالعات سرواپیدمیولوژیکی و باکتریولوژیکی که انجام گرفته است مبنی بر افزایش ابتلا به این بیماری درسطح کشور می باشد. علیرغم واکسیناسیون بر علیه لپتوسپیروزیس در برخی نقاط کشور همچنان بیماری در کشور وجود دارد. بنابراین هدف از اجرای این پروژه ملی جدا سازی و شناسایی سرووارهای غالب بیماریزای لپتوسپیرا در دام در استان های اردبیل، کرمانشاه، گیلان، مازندران، گلستان، خوزستان، فارس و بوشهر می باشد. در این تحقیق از 2583 گاو نمونه خون و 617 نمونه ادرار گرفته شد. نمونه های ادرار جهت کشت و PCR و نمونه خون جهت آزمایش سرولوژیکیMAT(microscopic agglutination test) مورد استفاده قرار گرفت.در این مطالعه از بین 617 نمونه ادرار در دام کشت داده شده ا ز نظر وجود لپتوسپیرا در دام های مورد مطالعه 12 نمونه کشت مثبت بود. نتایج آزمایش سرولوژی MAT نشان داد که از بین 2583 نمونه دام های مورد بررسی در استان های مورد مطالعه تعداد 778 مورد (12/30%) تیتر سرمی مثبت و 1805 مورد (88/69%)تیتر سرمی منفی بودند. تیتر سرمی نمونه های مثبت دارای تیترسرمی 200/1 تا 12800/1 بودند. در بررسی فراوانی سرووارهای شایع در کل استان ها ، سرووارهای:L.Serjo hardjo, L.Icterohaemorrhagia, L.Grippotyphosa, L. Autumnalis, L. Sejroe sejroe, L.Canicola, L. Pyrogenes, L. Pomona, L. Australis, L. Panama, L.Javanica, L.Tarassovi, L.Bataviae, L.Ballum دارای تیتر بودند. در بین نمونه های دارای تیترمثبت بیشترین سرووار L. Serjo hardjo با 307 مورد (46/39%) و سپس L. Icterohaemorrhagia با 167 مورد (46/21%) بود. شایان ذکر است که سرووار های L. Pyrogenes, L. Australis, L. Panama, L.Javanica, L.Tarassovi, L.Bataviae, L.Ballum برای اولین بار در دام در ایران مشاهده شده است و تا کنون گزارش نشده بودند. تعداد 617 نمونه ادرار گاو بااستفاده از پرایمر اختصاصی lipl32 جهت تشخیص آلودگی لپتوسپیرا مورد آزمایش قرار گرفت. تعداد 133 (56/21 درصد) نمونه در آزمون PCR مثبت و 484 (44/78 درصد) نمونه منفی و هیچگونه باندی مشاهده نشد. نتایج خوب آزمایش PCR بااستفاده از پرایمر اختصاصی lipl32 در این تحقیق نشان داد که PCR یک روش سریع، حساس و اختصاصی برای تشخیص عفونت ها لپتوسپیرایی در دام خصوصا در چند روز اول بیماری می باشد.کلمات کلیدی : لپتوسپیرا ، لپتوسپیروزیس، کشت ، , MAT, lipl32 PCR