تولید آنتی بادی نوترکیب بر علیه پروتیین تشکیل دهنده پیلوس باکتری

بیماری شانکر باکتریایی مرکبات از جمله مهمترین بیماری های مرکبات می باشد که همه ساله خسارت زیادی به این محصول وارد می نماید. این بیماری توسط باکتری Xanthomonas citri subsp. citri ایجاد می گردد. عدم دسترسی به منابع مقاومت طبیعی باعث گردیده که مبارزه با این بیماری با مشکلات فراوانی همراه گردد. برای ایجاد مقاومت بر علیه بیماری های ویروسی، قارچی و فیتوپلاسمایی می توان از آنتی بادی های نوترکیب استفاده نمود. برای این منظور می بایستی که تولید پلانتی بادی برعلیه پروتیین های ضروری پاتوژن در گیاه صورت پذیرد. در این تحقیق پروتیین تشکیل دهنده پیلوس، HrpE، در سیستم ترشحی نوع 3 باکتری عامل شانکر مرکبات که نقش اساسی در فرایند بیماری زایی دارد به عنوان هدف جهت تولید آنتی بادی نوترکیب مونوکلونال انتخاب گردید. برای این منظور از پروتیین نوترکیب خالص HrpE برای جدا سازی آنتی بادی های مونوکلونال اختصاصی استفاده گردید. بیان و تولید انبوه پروتیین HrpE در باکتری اشریشیاکلی صورت پذیرفت. خالص سازی پروتیین نوترکیب HrpE با استفاده از روش کروماتوگرافی تمایلی بر روی ستون نیکل صورت پذیرفت. تکنولوژی نمایش فاژی برای تولید آنتی بادی نوترکیب مونوکلونال استفاده گردید. فاژ های حاوی آنتی بادی اختصاصی در مراحل مختلف غربال گری جدا سازی و تکثیر گردیده و پس از 3 دور غربال گری، این فاژها با استفاده از روش الیزا جداسازی گردیدند. آنتی بادی های موجود در سطح فاژ ها از نوع نواحی متغیر متصل به هم (scFv) بوده که پس از جداسازی کلون های مولد، تنوع آنها با استفاده از روش تعیین ترادف مورد بررسی قرار گرفتند. آنالیزهای تکمیلی وسترن بلاتینگ و الیزا بر روی scFv های اختصاصی منفرد حاکی از اختصاصیت بالای آنتی بادی های حاصله بر علیه پروتیین HrpE می باشد. لغات کلیدی: شانکر باکتریایی مرکبات، Xanthomonas citri Subsp. citri، آنتی بادی نوترکیب، پیلوس