جداسازی و شناسایی اورنیتوباکتریوم رینوتراکیال از نمونه های ماکیان تجاری ارسالی به درمانگاه طیور موسسه رازی و کشتارگاه های اطراف کرج

اورنیتو باکتریوم رینوتراکیال با سایر عوامل بیماریزای تنفسی در ماکیان و بوقلمون ها همراه بوده و هر چند بیماریزایی باکتری به صورت اولیه هم به اثبات رسیده است ولی در اکثر موارد به همراه سایر پاتوژنها خسارت اقتصادی سنگینی وارد نموده و موجب علایم تنفسی، کاهش رشد، کاهش تولید تخم مرغ و افزایش مرگ و میر و حذف کشتار گاهی میگردد،با عنایت به اینکه بهترین واکسن، واکسن اتوژن تهیه شده از سوشهای محلی است و از طرفی برای انجام کارهای تحقیقاتی، جدیدترین جدایه ها لازم است،لذا نسبت به جداسازی باکتریاز نمونه های نای، سینوس و سواپ نای تهیه شده از50 گله طیورارسالی بهکشتارگاه های طیور اطراف کرج و از نمونه هایارسالی به کلینیک تشخیص بیماریهای طیور موسسه رازی با کمک روشهای استاندارد باکتریولوژیک اقدام گردید و نمونه ها در محیط بلاد آگار دارای جنتامایسین و بلاد آگار معمولی کشت داده شد و پس از خالص نمودن پرگنه های مشکوک، شناسایی اولیه باکتری با تعیین خواص بیوشیمیایی و از جمله مورفولوژی و رنگ آمیزی(پلیومورف و گرم منفی) تعیین اکسیداز( با توجه به اکثر سویه های اکسیداز مثبت و احتمال سویه های اکسیداز منفی) و کاتالاز(منفی) انجام شد. مواردی که در این مرحله ORT تشخیص داده شد برای مرحله بعدی انتخاب شدند. استخراج DNAباکتریها با استفاده ازکیتو همچنین روش فنل کلروفرمانجام گرفته و سپس با استفاده از یک جفت پرایمر اختصاصی، قطعه ای از ژنوم (16s RNA ) به اندازه bp 784 در روش PCR تکثیر گردید و بدین وسیله نسبت به شناسایی مولکولی نمونه جدایه های حاصله اقدام گردید. حدود 20 جدایه با روش های فوق جداسازی شد،جدایه های فوق به منظور ذخیره سازی با گلیسرین مخلوط شده و بر اساس اصول seed lot system دارای بار کد ( ID number ) شده و در بانک بیولوژیک ( Bio-bank ) ذخیره شد. نگهداری در دمای بسیار پایین از قبیل 70ċ- یا ازت مایع ( liquid nitrogen )و همچنین نگهداری در حالت خشک (lyophilized) از جمله روش های نگهداری طولانی مدت میکروارگانیسم ها میباشد که در این مطالعه صورت گرفت.