ارزیابی مکانیسم مهاریsiRNA اختصاصی spalt like transcription factor 4 بر روی سلولهای سرطان سینه

سابقه و هدف: در سلولهای متفاوت میزان بیان ژن sall4 کم یا خاموش می ماندو همچنین مدارک موجود نشان می دهد که بیان Sall4 در سرطان مجداد فعال (reactive) می شود. بیان این ژن سبب ایجاد مقاومت دارویی می گردد. RNA مداخله گر (RNAi) یک مکانیسم خاموش سازی پس از رونویسی ژن (PTGS) است که در سلول های گیاهی،پستانداران و برخی از بی مهرگان یافت می شود. RNAi به فرم های مختلفی وجود دارد. فرم siRNA یک مولکول کلیدی در مسیر RNAi است.siRNA مولکول های کوتاه دورشته ای 20 تا 25 نوکلوتیدی بوده که در دو سوی خود در بخش 3 ،دو نوکلوتید بیرون زده دارد. در سیتوپلاسم،siRNA با مجموعه ای به نام کمپلکس خاموش کننده ی با واسطه RNA(RISC) گرد هم می آید. کمپلکس RISC سپس تمام mRNA های داخل سلول را اسکن نموده و به کمک siRNA خود بصورت اختصاصی به سمتRNA هدف هدایت می شود. MRNAهدف با اتصال به بخش مکملsiRNA شناسایی وتوسط RISC تجزیه و تخریب شده و بیان آن سرکوب می گردد . خاموش سازی ژن به واسطه siRNA، نمونه جدیدی از کشف و طراحی داروها را ارائه می دهد که نسبت به مولکول های کوچک معمول و آنتی بادی مونوکلونال قوی تر است . از لحاظ تئوری،RNAi می تواند بیان mRNA هر ژنی از جمله فاکتور های رشد،انکوژنها،ژن های آنتی آپوپتوز و ژن هایی که توسط مهارکننده های کوچک مولکولی non_druggable فرض شده اند را سرکوب و خاموش کند . در نتیجه میانجی گری RNAi، نه تنها یک ابزار بیولوژیکی برای ارزیابی عملکرد ژن است،بلکه به همان اندازه دارای پتاسیل درمانی است .در این مطالعه با استفاده از توالی اختصاصی SiRNA بر علیه توالی این ژن فعالیت آن را در رده سلول سرطان سینه مورد بررسی قرار می گیرد. مواد و روش ها: کشت سلول های سرطان سینه در شرایط آزمایشگاهی به صورت in vitro و بررسی اثر توکسی سیتی دارو 1- ترانسفکشن SiRNA مورد نظر به سلول سرطانی با استفاده از نانوذرات لیپوزومی لیپوفکتامین در گروه های کنترل منفی سلول- کنترل SiRNA- گروه با دارو استاندارد و تایید ترانسفکت با استفاده از SiRNA لیبر با ماده نشان دار 2- استخراج RNA و بررسی بیان ژن Sall4 به روش Real time PCR در گروه های کنترل منفی سلول- گروه با داور های استاندارد: استخراج RNA و سنتز cDNA و بررسی بیان ژن های دخیل در مسیرهای چرخه سلولی، Sall4 . 3- آنالیز آماری با استفاده از نرم افزار GraphPad Prism 6 انجام گرفت. از تست ANOVA و Post-test های مربوطه برای مقایسه بین گروهها استفاده شد. نتیجه گیری: SALL4 اختصاصی ضد siRNA تاثیر دارو استاندارد را در سلولهای سرطان SALL4 با کاهش بیان ژن سینه افزایش دهد می تواند به عنوان داروی ترکیبی به همراه این دارو مورد استفاده قرار گیرد.

کلیدواژه ها:

سرطان سینه ، SiRNA ، Sall4