کلونینگ و بیان ژن hly Listeria monocytogenes در Lactococcus lactis

ژن hly یکی از مهم ترین عوامل ویرولانس Listeria monocytogenes می باشد که پروتئین لیستریولیزین (O (LLO را رمزگذاری می کند. LLO یک پروتئین ایمونوژن با قابلیت بالاست، که قادر به برانگیختن ایمنی سلولی و هومورال است و علاوه بر فعالیت همولیتیک، عملکردهای متعدد دیگری نیز دارد. این پروتئین با تخریب فاگولیزوزوم به فرار باکتری از سیتوپلاسم، زنده ماندن و رشد درون سلولیL. monocytogenes کمک می کند.از طرفی Lactococcus lactis سویه ای از باکتریهای اسید لاکتیک می باشد که برای بیان پروتئین های نوترکیب کاربرد زیادی دارد. هدف ما در این تحقیق بیان آنتی ژن نوترکیب LLO در سویه L. lactis بود.که این کاردر ابتدا با واسطه پلاسمید pTG19-T (وکتور T/A کلونینگ) و سپس با استفاده از پلاسمید pNZ8110 که مربوط به سیستم پلاسمیدهای بیانی ترشحی مختص L. lactis می باشد، انجام گردید. ژن hly، با طراحی محل برش آنزیم های محدود کننده در دو سر ژن، وارد پلاسمید شده و پس از کلونینگ و تکثیر در E. coli MC1061 بعنوان میزبان واسط با روش الکتروپوریشن وارد L. lactis گردیده و در نهایت پروتئین LLO بیان گردید. بیان این پروتئین با استفاده از روش SDS PAGE و وسترن بلات تایید شد.

کلیدواژه ها:

لیستریولیزین ، Listeria monocytogenes ، Lactococcus lactis ، کلونینگ