ساخت و آنالیز بیان ناقل گیاهی pCaBGi

بیان موقت مبتنی بر تزریق اگروباکتریوم در برگ گیاه روش نسبتا سریع و قابل اعتمادی برای آنالیز توالی های تنظیمی است. به منظور بهره گیری از مزایای این تکنیک یک ناقل بیانی مناسب برای انجام آزمون بیان موقت عناصر تنظیمی مبتنی بر تزریق اگروباکتریوم مورد نیاز است. در این مطالعه بمنظور ساخت یک ناقل بیانی گیاهی، جایگاه های آنزیمی مناسب از وکتور pBGi به عنوان قطعه در نظر گرفته شد و وکتور pCAMBIA3301 حامل ژن گزارشگر GUS پس از حذف پرموتر CaMV 35S به عنوان توالی پایه استفاده شد. وکتور جدید به نام pCaBGi از طریق وارد نمودن قطعه BamHI/SnaBI از وکتور pBGi به جای قطعه BamHI/SnaBI در وکتور pCAMBIA3301 ساخته شد. تایید ناقل جدید با استفاده از روش کلنی PCR و توالی یابی بوسیله آغازگرهای PSh4-F2/R انجام شد. عدم بیان ژن گزارشگر در میزبان پروکاریوتی با سنجش فعالیت آنزیم بتاگلوکورونیداز در سویه GV3101 اگروباکتریوم به عنوان یک سیستم پروکاریوتی تایید شد. تزریق سلول های اگروباکتریوم حامل وکتور pCaBGi در برگ توتون بیان پایه بسیار جزئی ناشی از فعالیت توالی حداقل پروموتری مشاهده شد. توالی وکتور pCaBGi با استفاده از برنامه sequin با شماره بازیابی MG719235 در بانک ژن ثبت شد.

کلیدواژه ها:

وکتورهای جفتی ، ساخت وکتور ، بیان موقت