کلونینگ و تعیین خصوصیات ژنی و ساختاری آنزیم کربوکسی متیل سلولاز باکتری Bacillus pumilusZ14

سلولازها گروهی از آنزیم های گلیکوزیل هیدرولازند که پیوندهای 1-و4 سلولز را هیدرولیز میکنند و به سه دسته کلی اندوگلوکانازها، اگزوگلوکانازها و گلوکوزیدها تقسیم میشوند. اندوگلوکانازها با قطع تصادفی پیوندهای گلوکوزیدی در نواحی داخلی زنجیره سلولز، تولید قطعات کوتاه الیگوساکاریدی میکنند. سویه های باسیلوس توانایی تولید انواعی از آنزیمهای خارج سلولی هیدرولیتیک و مهم از لحاظ صنعتی از قبیل سلولازها را دارند. انواع مختلفی از اندوگلوکانازهای گونه های باسیلوس شناسایی شده اند؛ که علاوه بر کاربردهای بیوتکنولوژیکی، از نظر اقتصادی نیز کاربرد وسیعی یافته اند. در این تحقیق باکتری Bacillus pumilus z14 را در اختیار داشتیم که قادر به تولید یک کربوکسی متیل سلولاز با پایداری حرارتی قابل ملاحظه بود.ژن کدکننده آنزیم سلولاز این باکتری همراه با نواحی بالادست و پایین دست آن، در داخل وکتورpTG19-T کلون گردید. نتایج حاصل از تعیین توالی نشان داد که ناحیه ORF این ژن شامل 1980 نوکلوتید میباشد که پروتیینی با 616 آمینواسید را کد میکند. توالی حاصل جهت طراحی مدل پروتیینی مورد استفاده قرار گرفت.این آنزیم از یک دومن کاتالیتیک از خانواده 9 گلیکوزیل هیدرولازها و یک دومن متصل شونده به سلولز از نوع 3 تشکیل شده است. از انجایی که این آنزیم توانایی هیدرولیز سوبستراهای طبیعی را دارد، میتواند در تهیه خوراک دام و تجزیه مواد لیگنوسلولزی تیمار شده کاربرد داشته باشد.

کلیدواژه ها:

سلولاز ، اندوگلوکاناز ، باسیلوس