تخلیص سازی و بیان پروتیین ORF2 ویروس هپاتیت E در باکتری اشرشیا کولی

هپاتیت E عامل هپاتیت حاد در میان مردم از گروه های سنی مختلف است و میزان مرگ و میر بالایی را شامل میشود بخصوص درزنان باردار که تا 30 % اعام شده است ، بنابراین پیشگیری اولیه از عفونت HEV ضروری است. هدف از این مطالعه به دست آوردن پروتیین ) ORF2 ( ، که ممکن است یک کاندید مناسب برای واکسن هپاتیت E در آینده باشد. ژن کوتاه شده orf2 ، اسید آمینه های 112 تا 660 از توالی پروتیین کپسید HEV بهینه سازی شده و سنتز شده را، کد گزاری می کند. بعد از القا با ایزوپروپیل- -D-β IPTG( thiogalactopyranoside ( و بهینه سازی شرایط احراز، پروتیین هدف به وضوح مشخص شده و توسط کروماتوگرافی کی لیت 2+(Ni ( پالایش می شود. پروتیین پالایش شده توسط الکتروفورز ژل پلی آکریل آمید سولفات سدیم دودسیل و روش وسترن بات استفاده می شود. نتایج به دست آمده از بهینه سازی شرایط احراز، نشان داد که، بالاترین احراز پروتیین، با اضافه کردن IPTG در غلظت نهایی، به اندازه یک میلی متر در 37 درجه سانتی گراد در هر چهار ساعت، به دست آمد. احراز و پالایش کردن پروتیین ORF2 با SDS-PAGE و روش وسترن بات، خیلی کوتاه تر شد. آنالیز SDS-PAGE یک پروه پروتیینی در حدود 50 کیلو دالتون را نشان داد. SDS-PAGE پروتیین خالص نشان داد که بالاترین مقدار از پروتیین هدف در بافر شستشو با 4/5 ph به دست آمد. عملکرد پروتیین خالص در حدود 1 میلی گرم بر لیتر بود.

کلیدواژه ها:

خالص سازی ، بیان ، پروتیین ORF2 ، هپاتیت E ، اشرشیا کولی